Applied Biosystems™ ViralSEQ™ Système de détection du virus de la minute de la souris (MMV)

Le Applied Biosystems ViralSEQ test de détection du virus de la minute de souris (MMV) fait partie d’un système intégré de purification de l’ADN et basé sur PCR en temps réel pour la détection rapide et sensible du MMV à partir d’une grande variété d’échantillons. L’ADN viral est isolé à partir d’un échantillon à l’aide du kit d’extraction d’acides nucléiques PrepSEQ 1-2-3 (disponible séparément). Une détection très sensible et spécifique de l’ADN viral est ensuite effectuée à l’aide TaqMan de la technologie PCR en temps réel. Le test comprend une molécule témoin positive propriétaire qui élimine la possibilité d’un résultat de test faux positif résultant d’une contamination involontaire de l’échantillon testé avec témoin positif.

Haute spécificité et délai rapide jusqu’aux résultats

Le ViralSEQ test MMV détecte les quatre souches connues de MMV : i, p, m et c, incluant sept séquences génomiques rapportées dans la base de données du NCBI. Le tableau 1 montre la spécificité du ViralSEQ test MMV et l’absence de réactivité croisée avec l’ADN non apparenté. Le flux de travail du test est simple et donne les résultats en un peu moins de 4 heures (Figure 1).

Processus simplifié pour la surveillance et la détection précoce

Le ViralSEQ test de détection MMV fait partie du programme Cell Culture Rapid Methods, conçu pour simplifier la détection de trois contaminants courants de la fabrication biopharmaceutique en culture cellulaire chez les mammifères (Figure 2). Le programme établit de nouvelles normes de flux de travail en matière d’efficacité et de qualité du produit, combinant une étape de préparation d’échantillon avec des essais en temps réel basés sur PCR pour la détection du mycoplasma, du vésivirus et du MMV sur une seule plateforme d’instrument.

Résultats fiables

Le ViralSEQ test de détection du MMV comprend un contrôle positif discriminatoire/d’extraction du MMV, qui est un ADN plasmidique contenant la séquence d’ADN du MMV reconnue par le test de détection du MMV (FAM sonde). Ce témoin (Figure 3) a été conçu pour se comporter comme de l’ADN de la MMV tant lors de la préparation de l’échantillon que lors de la détection du processus. De plus, le contrôle a été conçu avec une séquence supplémentaire VIC de liaison de sonde. La présence des deux FAM et VIC du signal dans une réaction PCR peut être utilisée pour distinguer un résultat positif entre le MMV (FAM) et l’ADN témoin (FAM et VIC). Ce nouveau contrôle permet un test de contrôle des pics d’ADN sans risque, éliminant la possibilité d’un faux positif dû à la contamination croisée accidentelle d’un échantillon de test avec l’ADN témoin positif.

Détection à basse altitude

Le ViralSEQ test de détection MMV utilise une technologie éprouvée TaqMan pour la détection à haute sensibilité jusqu’à 10 copies de l’ADN génomique MMV par réaction PCR (particules virales équivalentes à 0,002 TCID50). L’analyse des dilutions en série de 10 fois de l’ADN génomique du MMV démontre la large plage dynamique et l’efficacité du test (Figures 4 et 5).

Méthode supérieure de préparation de l’échantillon

Le kit d’extraction d’acides nucléiques PrepSEQ 1-2-3 (disponible séparément, Cat. No 4452222) aide à permettre une récupération constante et en pourcentage élevé de l’ADN génomique du MMV à partir de types d’échantillons complexes incluant CHO des cellules et du sérum bovin. La figure 6 montre que les valeurs de Ct de l’ADN extrait d’un échantillon spiké étaient comparables à celles d’un contrôle non spiké amplifié lors de la réaction PCR en temps réel, démontrant la récupération très efficace de l’ADN à l’aide du kit PrepSEQ 1-2-3.