Thermo Scientific™ MuA Transposase

Le Kit de Génération System™ de Mutations (MGS™ Kit) est conçu pour la construction rapide de bibliothèques de mutations par insertion pour tout type de clone d’ADN. Le système utilise la machinerie de transposition très efficace du bactériophage Mu pour générer un pool de mutants d’insertion à 15 pb pouvant être utilisés dans diverses analyses fonctionnelles des protéines codées ou des régions d’ADN régulatrices.

Thermo Scientific Les produits de transposons sont basés sur la machinerie de transposition du bactériophage Mu. Pendant la phase lytique du cycle de vie du phage, la machinerie réplique son génome en transposant à plusieurs reprises à l'intérieur du génome de l'hôte. La réaction de transposition Mu a été modifiée en une réaction in vitro catalysée par une seule enzyme – la transposase MuA. Dans ce système, une seule réaction in vitro peut générer plus d’un million de clones d’insertion de transposonsons.

Caractéristiques
Le système de génération de mutations (MGS Kit) et le système de génération d’arrêt (STOP Kit) ont été développés pour l’analyse fonctionnelle des protéines. Ces nouveaux outils de transposons permettent de créer des bibliothèques saturées de protéines mutées en une seule réaction, avec moins de temps d’intervention que toute autre méthode. L’emplacement de l’insertion du transposon dans chaque clone muté peut être cartographié soit par PCR, soit par séquençage. Avec des kits STOP, des milliers de clones mutés sont prêts pour des études d’expression MGS en seulement 2 à 3 jours.

Le MGS kit contient l’ensemble complet des réactifs pour la mutagenèse de balayage par liaison à base de transposons de toute protéine cible. Les MGS Entranceposons sont conçus pour effectuer des changements subtils dans la structure d’une protéine cible en insérant des liaisons dans le cadre de 15 bp à travers le gène cible correspondant. Cette insertion dans le cadre permet de conserver les séquences en aval.

Les entrées du kit STOP contiennent des codons d’arrêt translationnels dans les trois cadres de lecture de la portion terminale de la séquence de transposons. La modification propriétaire du système de génération d’arrêts permet de générer une bibliothèque de délétion saturée C-terminale à partir de pratiquement n’importe quelle protéine cible avec un ajout maximal de trois acides aminés.

Faits marquants

• Efficace – Créer des bibliothèques d’insertion saturée pour le séquençage et l’analyse des protéines dans une seule réaction
• Rapide – Moins de temps de jeu pratique comparé aux méthodes conventionnelles
• Aléatoire - Éliminer la préférence du site cible ou le point chaud d’insertion

• Enzymes
• Récepteurs
• Protéines structurales, etc.
  Le MGS kit génère aléatoirement quinze paires de bases en insertions in vitro dans n’importe quel ADN cible pour :
• Génération rapide de bibliothèques d’insertion de cinq acides aminés dans le cadre de toute protéine pour des analyses fonctionnelles
• Mutagenèse rapide et aléatoire des promoteurs clonés et d’autres régions régulatrices de l’ADN
• Insertion aléatoire d’un site enzymatique de restriction NotI dans tout clone d’ADN cible

• Transposase MuA (F-750) :
• Transposase MuA (0,22 μg/μL, 20 μL)
• Tampon de réaction 5x

• Transposase MuA concentrée (1,1 μg/μL, 20 μL)
• Tampon de réaction 5x
• Tampon de stockage MuA

• Transposase MuA (0,22 μg/μL dans le tampon de stockage MuA)
• Entranceposon (STOP-KanR) (100 ng/μL dans le tampon TE)
• Tampon de réaction 5x pour la transposase MuA
• DMSO 100%
• ADN cible de contrôle (370 ng/μL dans le tampon TE)
• Amorce MuEnd-2 (25 μM dans de l’eau DD)
• Primer SeqE (10 μM dans de l’eau dd)
• SeqW Primer (10 μM dans de l’eau DD)

• Transposase MuA (0,22 μg/μL dans le tampon de stockage MuA)
• Entranceposon (M1-CamR) (100 ng/μL dans le tampon TE)
• Entranceposon (M1-KanR) (100 ng/μL dans le tampon TE)
• Tampon de réaction 5x pour la transposase MuA
• ADN cible de contrôle (370 ng/μL dans le tampon TE)

Génération rapide de bibliothèques d’insertion de cinq acides aminés dans le cadre de toute protéine pour des analyses fonctionnelles, mutagenèse rapide et aléatoire de promoteurs clonés et d’autres régions régulatrices de l’ADN, insertion aléatoire d’un site enzymatique de restriction NotI dans tout clone d’ADN cible