Applied Biosystems™ TaqMan™ Kit avancé de synthèse d’ADNc de miARN

Les caractéristiques du TaqMan flux de travail avancé des miARN incluent :

• Sensibilité : une sensibilité élevée permet de quantifier les cibles de miARN à faible expression, surtout dans les fluides biologiques tels que le plasma, le sérum et les tissus
• Flexibilité : la chimie RT universelle génère des gabarits universels d’ADNc pour tous les miARN présents dans l’échantillon, permettant une certaine flexibilité dans la conception de l’étude
• Économies d’échantillons : nécessite seulement 2 μL d’apport plasma/échantillon sérique et génère assez d’ADNc pour 600 réactions qPCR (20 μL) ou 1200 réactions qPCR (10 μL)
• Spécificité : l'étape de ligation de 5' permet la discrimination d'une seule paire de bases sur toute la séquence de miARN, y compris les inadéquations difficiles à détecter à l'extrémité 5'
• Chimie de référence TaqMan : Ce kit est conçu pour être utilisé avec TaqMan des essais avancés de miARN pour qPCR, qui s'appuient Thermo sur le pipeline de conception d'essais bioinformatiques et le système de validation de Fisher Scientific, de pointe dans l'industrie, afin d'assurer une grande spécificité et une réactivité croisée minimale, même pour les familles de miARN étroitement apparentées.

Le TaqMan kit avancé de synthèse d'ADNcDNA des miARN utilise un détachage poly-A 3' et une ligation 5' d'une séquence adaptatrice pour étendre les miARN matures présents dans l'échantillon à chaque extrémité avant la transcription inverse. Les amorces RT universelles reconnaissent les séquences universelles présentes aux extrémités étendues 5' et 3' des miARN matures. Tous les miARN matures de l’échantillon sont rétrotranscrits en ADNc.

Afin d’améliorer la détection des cibles miARN à faible expression, l’ADNc est ensuite amplifié à l’aide des amorces universelles miR-Amp et du mélange maître miR-Amp afin d’augmenter uniformément la quantité d’ADNc pour chaque cible, en maintenant les niveaux d’expression différentiels relatifs. Contrairement à la pré-amplification traditionnelle, les amorces universelles miR-Amp reconnaissent les séquences universelles ajoutées à tous les miARN matures aux extrémités 5' et 3', assurant ainsi qu'il n'y a pas de polarisation d'amplification.

Note : le TaqMan kit de synthèse avancée d’ADNcDNA de miARN n’est pas compatible avec les essais microARN de première génération TaqMan pour la qPCR. Pour la transcription inversée des cibles de miARN à l’aide d’amorces RT spécifiques aux miARN, veuillez consulter le TaqMan MicroRNA Reverse Transcription Kit.