Invitrogen™ SuperScript™ Trousse de synthèse d’ADNcDNA III CellsDirect™

Le kit de synthèse d’ADNc SuperScript III CellsDirect est optimisé pour la synthèse d’ADNc de première brin directement à partir d’un lysat cellulaire de mammifère, sans isoler d’abord l’ARN. La lyse et la transcription inverse sont effectuées dans le même tube, et l’ADNc de première brin résultant est prêt à être utilisé pour le clonage et la PCR.

Les caractéristiques du kit de synthèse SuperScript III CellsDirect incluent :
• Compatible avec une large gamme de types cellulaires de mammifères cultivés sous différentes conditions
• de traitement Le format à tube unique minimise la perte de réactif, la perte d’échantillons et le temps
• de manipulation du volume total de lysat est utilisé dans la réaction de synthèse de l’ADNc de première brin, offrant des rendements plus élevés avec un nombre limité de cellules et permettant la détection de transcrits rares SuperScript
• III Reverse Transcriptase, avec une activité RNase H réduite et une stabilité thermique accrue, produit de hauts rendements d’ADNc lors de la réaction de synthèse du premier brin, pour une plus grande sensibilité et une détection améliorée des transcrits
• rares. Génère un ADNc de haute qualité pour une utilisation dans diverses applications, incluant le clonage et la PCR
•. Le protocole simple prend moins de deuxheures

. Fonctionnement
Dans le RT-PCR traditionnel, l’ARN est d’abord isolé des cellules dans une procédure longue qui peut entraîner une perte de matériau. À l’aide du kit de synthèse d’ADNc SuperScript III CellsDirect , les cellules sont lysées et l’ADNc est généré à partir du lysat dans un seul tube avec une manipulation minimale et aucune perte d’échantillon. La DNase I est ajoutée pour éliminer l’ADN génomique avant la synthèse du premier brin. Ce kit a été optimisé pour des échantillons de petites cellules, allant de 10 000 cellules jusqu’à une seule cellule (mesurée par dilution sérielle). L’utilisation du SuperScript III Reverse Transcriptase assure une grande spécificité et des rendements élevés d’ADNc à partir de petites quantités de matière de départ (aussi peu que 10 pg ARN au total). Après synthèse, l’ADNc de premier brin peut être amplifié avec des amorces spécifiques par PCR sans extractions organiques intermédiaires ni précipitations d’éthanol.