Thermo Scientific™ Pierce™ Kit quant d’endotoxines chromogéniques

L’endotoxine est un lipopolysaccharide (LPS) qui constitue une grande partie de la membrane externe de la paroi cellulaire chez les bactéries à Gram négatif. Le LPS est l’antigène le plus abondant à la surface cellulaire de la plupart des bactéries à Gram négatif. Le Thermo Scientific Pierce Chromogenic Endotoxin Quant Kit est un test final hautement sensible qui mesure et détecte avec précision l’endotoxine dans un échantillon de protéine, peptide, acide nucléique (ADN ou ARN), vaccin ou anticorps à l’aide du test du lysat d’amebocyte. Le lysat d’amebocyte de Limulus (LAL) est largement utilisé comme test simple et sensible pour la détection des endotoxines.

Les caractéristiques et avantages du kit Pierce Chromogenic Endotoxin Quant incluent :
• Très sensible avec une large plage—, détecte aussi peu que 0,01 EU/mL à 1 EU/
• mL. Spécifique—sans interférence des ß-glucanes et adapté à une large gamme d’échantillons, y compris plasma, protéine, vaccin, plasmide ou acides nucléiques (ADN et ARN). •
Exécution rapide—du test en aussi peu que 20 minutes

Thermo Scientific Pierce. Le kit quant d’endotoxine chromogénique est un test final hautement sensible qui utilise des lysats amebocytaires Limulus (LAL) dérivés du sang du crabe fer à cheval (Limulus) polyphème) pour mesurer et détecter avec précision les endotoxines. Les endotoxines peuvent être trouvées dans un échantillon de plasma, de protéine, de peptide, d’acide nucléique ou d’anticorps. Ces kits quantitatifs d’endotoxines chromogéniques permettent la détection dans de larges plages de sensibilité de 0,01 à 1,0 EU/mL* à l’aide d’un spectrophotomètre standard ou d’un lecteur de plaques à 405 –410 nm. Nos kits flexibles vous permettent d’analyser des échantillons dans une plage basse de 0,01 –0,1 EU/mL ou dans une plage haute de 0,1 –1,0 EU/mL, selon vos besoins de recherche.

Le Pierce Chromogenic Chromogenic Endotoxin Quant Kit utilise la méthode du lysat d’amebocyte, qui mesure l’interaction de l’endotoxine avec la proenzyme Factor C présente dans les amebocytes circulants du crabe fer à cheval. L’activité proolytique de cette proenzyme s’active en présence de LPS. Les niveaux d’endotoxines sont déterminés en mesurant l’activité du facteur C en présence du substrat peptidique synthétique chromogénique incolore (Ac-Ile-Glu-Ala-Arg-pNA) qui libère de la p-nitroaniline (pNA) après la protéolyse, produisant une couleur jaune mesurable à une absorbance de 405 nm. L’intensité de couleur développée est directement proportionnelle à la quantité d’endotoxine présente dans l’échantillon et est calculée à l’aide d’une courbe standard d’une quantité connue d’endotoxine. Ce test est devenu la norme de l’industrie pour la détection des endotoxines dans les produits pharmaceutiques, les dispositifs médicaux, les tests alimentaires et hydriques, ainsi que dans les sciences de la vie et la recherche médicale.

Association entre endotoxines et maladies
Les endotoxines sont libérées dans leur environnement environnementant lorsque les bactéries à Gram négatif subissent une division cellulaire normale ou en grandes concentrations lorsqu’elles sont endommagées ou subissent une lyse cellulaire. Étant donné que les endotoxines sont pyrogènes (induisent la fièvre) chez les mammifères, identifier et surveiller les niveaux d’endotoxines est extrêmement important dans de nombreux domaines, y compris l’étude du microbiome pour évaluer la réponse immunitaire périphérique d’une maladie spécifique. Les endotoxines ont été associées à la stéatose hépatique non alcoolique (NAFLD), à la maladie méningococcique et à divers types de septicémie. Les endotoxines peuvent poser problème chez les patients brûlés en raison de la translocation de bactéries endogènes et de la perte de liquides, entraînant des maladies gastro-intestinales telles que l’ischémie intestinale ou des lésions intestinales. La gravité des symptômes de maladies telles que la maladie de Crohn’, la colite ulcéreuse et la fibrose kystique a également été liée à la quantité de LPS dans l’intestin.

Spécificité des kits
quantitatifs d’endotoxines chromogéniques Pierce Mesurés avec le kit quant d’endotoxines chromogéniques Pierce, les niveaux d’endotoxines dans les échantillons sont précisément déterminés à l’aide de la norme d’endotoxine incluse de concentration connue, dérivée de la souche d’E. coli O111 : B4. La faible plage de sensibilité de ce test permet une dilution plus élevée d’échantillons en quantité limitée ou contenant des substances interférentes, aidant ainsi à éviter des faux négatifs ou faux positifs potentiels lors de la quantification des endotoxines. Ce test est également compatible avec (1,3)—βD-glucan, un composant de la paroi cellulaire des bactéries et des champignons. β-les glucanes ne sont pas pyrogènes, mais peuvent activer le facteur G et déclencher la cascade de coagulation, produisant des faux positifs dans le dosage du lysat d’amebocyte. βLes bloqueurs de glucan ne sont pas requis pour ce test et, dans les échantillons contenant ≤10 ng/mL de (1,3)-βD-glucan, aucune amélioration n’est observée. Veuillez consulter le tableau 1 des chiffres de données pour plus d’informations sur les réactifs testés et les interactions.

Importance du test
des endotoxines Bien que les endotoxines ne soient pas des organismes infectieux, elles sont toxiques et peuvent déclencher un choc endotoxique, une inflammation ou une septicémie chez les animaux et les cultures tissulaires. Étant donné que ces composés sont stables à la chaleur et peuvent résister aux procédures de stérilisation, l’identification de la contamination par des endotoxines est extrêmement importante. Le dépistage des endotoxines sensibles est également essentiel en sciences de la vie et en recherche médicale en raison des faibles niveaux d’endotoxines nécessaires pour la culture cellulaire et la recherche animale in vivo.

L’élimination et le test des endotoxines sont également nécessaires dans des échantillons produits à partir de bactéries à gram négatif avant la transfection cellulaire ou l’injection animale. Déterminer les niveaux d’endotoxines est important pour évaluer l’efficacité des méthodes d’élimination des endotoxines et prévenir le choc endotoxique, l’inflammation et/ou la septicémie dans les cellules de culture tissulaire et les animaux injectés avec des protéines contaminées par les endotoxines.

*Une unité d’endotoxine/mL (EU/mL) équivaut à environ 0,1 ng d’endotoxine/mL de solution.

Produits connexes :
Pierce™ Résine d’élimination des endotoxines à haute capacité (Cat. Non.  88270)
Pierce™ Colonnes de spins à haute capacité pour élimination d’endotoxines (Cat. Non.  88274)