Molecular Probes™ MitoProbe™ Trousse d’analyse JC-1

Le MitoProbe™ kit d’analyse JC-1 est un test rapide et fiable utilisé pour détecter les changements dans les mitochondries par cytométrie en flux.

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Sélectifs aux changements mitochondriaux
Le colorant JC-1 permanent à membrane est largement utilisé dans les études d’apoptose pour surveiller la santé mitochondriale. Le colorant JC-1 présente une accumulation dépendante du potentiel dans les mitochondries, indiquée par un décalage d’émission fluorescente du vert (∼529 nm) au rouge (∼590 nm). Par conséquent, la dé-polarisation mitochondriale est indiquée par une diminution du rapport d’intensité de fluorescence rouge/vert. Le décalage de couleur sensible au potentiel est dû à la formation dépendante de la concentration d’agrégats J fluorescents rouges.

Contrairement à d’autres colorations mitochondriales influencées par le potentiel de membrane plasmique, le rapport de fluorescence verte à rouge de JC-1 dépend uniquement du potentiel de la membrane et non d’autres facteurs tels que la taille, la forme et la densité mitochondriales, qui peuvent influencer les signaux de fluorescence monocomposants. L’utilisation de la détection du rapport de fluorescence permet aux chercheurs de comparer le potentiel membranaire et de déterminer le pourcentage de mitochondries au sein d’une population qui répondent à un stimulus appliqué.

Indicateur d’apoptose
précoceUne caractéristique distinctive des premiers stades de la mort cellulaire programmée est la perturbation des mitochondries actives. Cette perturbation mitochondriale inclut des changements dans le potentiel membranaire et des altérations du potentiel d’oxydation-réduction des mitochondries. On suppose que les changements dans le potentiel membranaire sont dus à l’ouverture du pore de transition de perméabilité mitochondriale (MPTP), permettant le passage d’ions et de petites molécules. L’équilibre résultant des ions conduit à son tour au découplage de la chaîne respiratoire et à la libération du cytochrome c dans le cytosol.

Protocole simple et simplifié
L’un des plus grands défis liés au travail avec des colorants à double émission comme le JC-1 est la rémunération. Le MitoProbe™ kit de test JC-1 fournit un perturbateur de potentiel membranaire mitochondriale, CCCP, afin de produire des contrôles de compensation menant à un rapport de fluorescence vert-rouge correctement compensé. Le protocole de tache est simple et direct : incuber les cellules avec le colorant JC-1, puis analyser le signal fluorescent dans les canaux FITC et PE d’un laser de 488 nm.