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Thermo Scientific™ Réticulateurs compatibles avec la spectrométrie de masse
Description
La réticulation chimique combinée à la spectrométrie de masse est une méthode puissante pour améliorer la caractérisation des protéines et identifier les interactions protéine-protéine. Cette méthode a été appliquée à des complexes protéiques recombinants et natifs, et plus récemment, à des lysats cellulaires entiers ou à des organismes unicellulaires intacts dans le but d’identifier les interactions protéine-protéine à l’échelle mondiale. La caractéristique d’enrichissement des DSPP et TBDSPP améliore la détection des protéines réticulées en réduisant la complexité des échantillons par la séparation des peptides réticulés des non réticulés.
• Réticulateur trifonctionnel : Ester NHS (des deux extrémités), acide phosphonique (DSPP) ou ester phosphonate (TBDSPP) dans l’espaceur pour l’enrichissement
• Réactifs cristallins de haute pureté pour la caractérisation •
de la structure et des interactions des protéines Version perméable par membrane (TBDSPP) pour la réticulation •
intracellulaire Enrichissant avec Fe-NTA IMAC ouTiO 2 MOAC
DSPP (disuccinimidyl phénylphosphonique, PhoX) et TBDSPP (tert-butyl disuccinimidyl phényl phosphonate, tBu-PhoX) sont des agents enrichissants en phospho contenant un ester N-hydroxysuccinimide réactif à l’amine (NHS) à chaque extrémité d’un bras espaceur à 7 atomes avec un groupe phosphonique (DSPP) ou un ester phosphonate (TBDSPP) pour l’enrichissement. Les deux réagissent efficacement avec les groupes amine primaires (-NH2) dans des tampons pH 7-9 –pour former des liaisons amides stables. L’acide phosphonique ou les groupes esters phosphonates peuvent ensuite être utilisés pour enrichir des peptides réticulés grâce à la chromatographie d’affinité métallique immobilisée (IMAC) ou à la chromatographie d’affinité par oxyde métallique (MOAC).
Parmi les deux réticulants enrichissants de la SEP, le DSPP est plus soluble dans l’eau que le TBDSPP et est meilleur pour la réticulation in vitro, les protéines purifiées simples et les complexes protéiques. TBDSPP est meilleur pour la réticulation intracellulaire en raison de la perméabilité accrue de la membrane. Bien que les deux réticulants puissent être enrichis par des méthodes traditionnelles de phosphopeptides, les peptides réticulés TBDSPP doivent d’abord être incubés avec TFA pour éliminer les groupes de protection tert-butyl. Le groupe acide phosphonique TBDSPP (après clivage acide) n’est pas un substrat pour les phosphatases, ce qui permet l’élimination des phosphopeptides endogènes dans les échantillons avant l’enrichissement.
Note : Pour une analyse à haute résolution des peptides réticulés, la colonne LC recommandée pour la source Nanospray Flex est la colonne LC Acclaim PepMap 100 C18 (Cat. No 164940 ou 164568). Pour la source EASY-Spray, la colonne LC recommandée est la colonne LC EASY-Spray C18 (Cat. Non. ES900 ou ES904).
• Réactifs cristallins de haute pureté pour la caractérisation •
de la structure et des interactions des protéines Version perméable par membrane (TBDSPP) pour la réticulation •
intracellulaire Enrichissant avec Fe-NTA IMAC ouTiO 2 MOAC
DSPP (disuccinimidyl phénylphosphonique, PhoX) et TBDSPP (tert-butyl disuccinimidyl phényl phosphonate, tBu-PhoX) sont des agents enrichissants en phospho contenant un ester N-hydroxysuccinimide réactif à l’amine (NHS) à chaque extrémité d’un bras espaceur à 7 atomes avec un groupe phosphonique (DSPP) ou un ester phosphonate (TBDSPP) pour l’enrichissement. Les deux réagissent efficacement avec les groupes amine primaires (-NH2) dans des tampons pH 7-9 –pour former des liaisons amides stables. L’acide phosphonique ou les groupes esters phosphonates peuvent ensuite être utilisés pour enrichir des peptides réticulés grâce à la chromatographie d’affinité métallique immobilisée (IMAC) ou à la chromatographie d’affinité par oxyde métallique (MOAC).
Parmi les deux réticulants enrichissants de la SEP, le DSPP est plus soluble dans l’eau que le TBDSPP et est meilleur pour la réticulation in vitro, les protéines purifiées simples et les complexes protéiques. TBDSPP est meilleur pour la réticulation intracellulaire en raison de la perméabilité accrue de la membrane. Bien que les deux réticulants puissent être enrichis par des méthodes traditionnelles de phosphopeptides, les peptides réticulés TBDSPP doivent d’abord être incubés avec TFA pour éliminer les groupes de protection tert-butyl. Le groupe acide phosphonique TBDSPP (après clivage acide) n’est pas un substrat pour les phosphatases, ce qui permet l’élimination des phosphopeptides endogènes dans les échantillons avant l’enrichissement.
Note : Pour une analyse à haute résolution des peptides réticulés, la colonne LC recommandée pour la source Nanospray Flex est la colonne LC Acclaim PepMap 100 C18 (Cat. No 164940 ou 164568). Pour la source EASY-Spray, la colonne LC recommandée est la colonne LC EASY-Spray C18 (Cat. Non. ES900 ou ES904).
Spécifications
Spécifications
| Réactivité chimique | Amine-Amine |
| Clivable | Non |
| Aperçu général | TBDSPP |
| Poids moléculaire (g/mol) | 552.46 |
| Pégylé | Non |
| Pureté | >90% |
| Longueur du bras espaceur | 4.3 Å |
| Contenu et stockage | À la réception, conservez à -20 °C à l’abri de l’humidité. |
| Perméabilité cellulaire | Oui |
| Gamme de produit | Réactifs MS |
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