Invitrogen™ SuperScript™ III SuperMix de Synthèse de Première Brine

Le SuperScript III First-Brand Synthesis SuperMix est une formulation optimisée pour la synthèse d’ADNc de première brin à partir de poly(A)⁺ purifié ou d’ARN total. Des cibles d’ARN allant de 100 pb à >12 kb peuvent être détectées avec ce système. La quantité de matière de départ peut varier de 0,1 pg à 5 μg d’ARN total.

Ce kit comprend un mélange enzymatique SuperScript III/RNaseOUT, un mélange de réaction 2X First-Brand et un tampon de recuit. SuperScript III Reverse Transcriptase est une version de MMLV RT conçue pour réduire l’activité RNase H et offrir une stabilité thermique accrue. L’enzyme peut être utilisée pour synthétiser de l’ADNc dans une plage de température de 45 –à 55 °C, offrant une spécificité accrue, des rendements plus élevés d’ADNc et un produit de longueur plus large que de nombreuses transcriptases inverses précédentes.

Utilisation du SuperScript III First-Brand Synthesis SuperMix
Le SuperScript III RT n’est pas significativement inhibé par l’ARN ribosomique et l’ARN de transfert et peut être utilisé pour synthétiser de l’ADNc à partir de l’ARN total. RNaseOUT L’inhibiteur de la RNase recombinante est inclus dans le mélange enzymatique afin de prévenir la dégradation de l’ARN cible due à la contamination par la ribonucléase. Le mélange réactionnel 2X de première brin comprend 10 mM de_{MgCl 2} et 1 mM de chaque dNTP dans une formulation tampon optimisée pour la synthèse de première brin de l’ADNc. Le tampon de recuit est utilisé lors de l’étape initiale de recuit du gabarit-amorce. Des tubes séparés d’oligo(dT)₂₀ et d’hexamères aléatoires sont également fournis. La synthèse de cDNA peut être réalisée en utilisant soit de l’ARN total, soit de l’ARN poly(A)⁺ sélectionné, amorcé avec de l’oligo(dT), des amorces aléatoires ou une amorce spécifique au gène.