Invitrogen™ SuperScript™ Système de synthèse à première brin pour RT-PCR

Le système de synthèse SuperScript First-Brand pour RT-PCR est optimisé pour la synthèse de l’ADN du premier brin à partir de poly(A)⁺ purifié ou ARN total. Le système peut être utilisé avec aussi peu que 1 ng ou jusqu’à 5 μg d’ARN total. Après synthèse, l’ADNc peut être amplifié avec des amorces spécifiques par PCR sans extractions organiques intermédiaires ni précipitations d’éthanol. En conjonction avec la PCR, le système peut être utilisé pour détecter la présence de messages rares, quantifier la quantité d’ARNm spécifique provenant d’un petit nombre de cellules, ou cloner des ADNc spécifiques sans construire toute une bibliothèque d’ADNc. Le système est flexible, permettant l’utilisation de n’importe quelle enzyme PCR. Combinez avec AccuPrime Taq l’ADN polymérase ou la polymérase à l’ADN platine Taq pour une PCR de plus haute spécificité ou avec l’ADN polymérase AccuPrime Pfx pour des applications de clonage haute fidélité.

SuperScript II RT
La réaction de synthèse de l’ADNc du premier brin est catalysée par le SuperScript II Reverse Transcriptase (RT). Cette enzyme a été conçue pour réduire l’activité de la RNase H qui dégrade l’ARNm lors de la réaction du premier brin, ce qui entraîne une synthèse d’ADNc sur toute la longueur et des rendements plus élevés d’ADNc de première brin que ceux obtenus avec les RTs RNase H+. Comme le SuperScript II RT n’est pas inhibé de manière significative par l’ARN ribosomique et l’ARN de transfert, il peut être utilisé efficacement pour synthétiser l’ADNc de première brin à partir d’une préparation totale d’ARN. L’enzyme présente une stabilité thermique accrue et peut être utilisée à des températures allant jusqu’à 50 °C.

Utilisation du système de synthèse SuperScript First-Brand pour la RT-PCR
Ce système a été optimisé pour synthétiser l’ADNc de première brin à partir de quantités variables de matière de départ. La concentration de RT en SuperScript II a été abaissée et RNaseOUT un inhibiteur de RNase recombinant a été ajouté au système dans le cadre de ce processus d’optimisation. De plus, les conditions de réaction ont été modifiées pour augmenter davantage la sensibilité du système. Avec le kit, vous synthétissez de l’ADNc de première brin en utilisant soit de l’ARN total, soit de l’ARN poly(A)⁺ sélectionné, amorcé avec oligo(dT), des amorces aléatoires ou une amorce spécifique à un gène. Ensuite, effectuez la PCR dans un tube séparé à l’aide d’amorces spécifiques au gène d’intérêt.