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Invitrogen™ SuperScript™ Système de synthèse à première brin pour RT-PCR

Numéro de catalogue. 11904018
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Description

Comprend

50 μL Oligo(dT)12-18 (0,5 μg/μL); 250 μL d’hexamères aléatoires (50 ng/μL); Tampon RT 1 mL 10X; 500 μL 25 mM chlorure de magnésium; 250 μL 0,1M DTT; 250 μL 10mM dNTP mix; 50 μL SuperScript II RT (50U/μL); 100 μL RNaseOUT (40U/μL); 50 μL E. coli RNase H (2U/μL); 1,2 mL d’eau traitée par DEPC; 15 μL ARN témoin (50 ng/μL); Amorce de contrôle A de 20 μL (10 μM); Amorce de contrôle 20 μL B (10 μM)

Le système de synthèse SuperScript First-Brand pour RT-PCR est optimisé pour la synthèse de l’ADN du premier brin à partir de poly(A)+ purifié ou ARN total.

The SuperScript First-Strand Synthesis System for RT-PCR is optimized for the synthesis of first-strand cDNA from purified poly(A)+ or total RNA. The system can be used with as little as 1 ng or as much as 5 μg of total RNA. After synthesis, the cDNA can be amplified with specific primers by PCR without intermediate organic extractions or ethanol precipitations. In conjunction with PCR, the system can be used to detect the presence of rare messages, to quantitate the amount of specific mRNA from small numbers of cells, or to clone specific cDNAs without constructing an entire cDNA library. The system is flexible, allowing the use of any PCR enzyme. Combine with AccuPrime Taq DNA Polymerase or Platinum Taq DNA Polymerase for higher specificity PCR or with AccuPrime Pfx DNA Polymerase for high-fidelity cloning applications.

Le système de synthèse SuperScript First-Brand pour RT-PCR est optimisé pour la synthèse de l’ADN du premier brin à partir de poly(A)+ purifié ou ARN total. Le système peut être utilisé avec aussi peu que 1 ng ou jusqu’à 5 μg d’ARN total. Après synthèse, l’ADNc peut être amplifié avec des amorces spécifiques par PCR sans extractions organiques intermédiaires ni précipitations d’éthanol. En conjonction avec la PCR, le système peut être utilisé pour détecter la présence de messages rares, quantifier la quantité d’ARNm spécifique provenant d’un petit nombre de cellules, ou cloner des ADNc spécifiques sans construire toute une bibliothèque d’ADNc. Le système est flexible, permettant l’utilisation de n’importe quelle enzyme PCR. Combinez avec AccuPrime Taq l’ADN polymérase ou la polymérase à l’ADN platine Taq pour une PCR de plus haute spécificité ou avec l’ADN polymérase AccuPrime Pfx pour des applications de clonage haute fidélité.

SuperScript II RT
La réaction de synthèse de l’ADNc du premier brin est catalysée par le SuperScript II Reverse Transcriptase (RT). Cette enzyme a été conçue pour réduire l’activité de la RNase H qui dégrade l’ARNm lors de la réaction du premier brin, ce qui entraîne une synthèse d’ADNc sur toute la longueur et des rendements plus élevés d’ADNc de première brin que ceux obtenus avec les RTs RNase H+. Comme le SuperScript II RT n’est pas inhibé de manière significative par l’ARN ribosomique et l’ARN de transfert, il peut être utilisé efficacement pour synthétiser l’ADNc de première brin à partir d’une préparation totale d’ARN. L’enzyme présente une stabilité thermique accrue et peut être utilisée à des températures allant jusqu’à 50 °C.

Utilisation du système de synthèse SuperScript First-Brand pour la RT-PCR
Ce système a été optimisé pour synthétiser l’ADNc de première brin à partir de quantités variables de matière de départ. La concentration de RT en SuperScript II a été abaissée et RNaseOUT un inhibiteur de RNase recombinant a été ajouté au système dans le cadre de ce processus d’optimisation. De plus, les conditions de réaction ont été modifiées pour augmenter davantage la sensibilité du système. Avec le kit, vous synthétissez de l’ADNc de première brin en utilisant soit de l’ARN total, soit de l’ARN poly(A)+ sélectionné, amorcé avec oligo(dT), des amorces aléatoires ou une amorce spécifique à un gène. Ensuite, effectuez la PCR dans un tube séparé à l’aide d’amorces spécifiques au gène d’intérêt.

Order Info

État d’expédition : Glace humide

Spécifications

Contenu et stockage

• Oligo(dT)12-18, 50 μL (0,5 μg/μL)
• hexamères aléatoires, 250 μL (50 ng/μL)
• tampon RT 10X, 1 mL
• chlorure de magnésium, 500 μL (25 mM)
• DTT, 250 μL (0,1 M)
• mélange dNTP, 250 μL (10 mM)
SuperScript™ • II RT, 50 μL (50 U/μL
RNaseOUT™ •), 100 μL (40 U/μL)
• RNase H d’E. coli, 50 μL (2 U/μL)
• d’eau traitée à DEPC, 1,2 mL ARN de contrôle, 15
μL (50 ng/μL)
• amorce de contrôle A, 20 μL (10 μM)
• amorce de contrôle B, 20 μL (10 μM)

à stocker à –20 °C. •
Format Kit
Performance de la PCR pour les régions riches en GC Élevée
Vitesse de réaction 50 min.
Technique Transcription inverse
Température de réaction optimale 42 °C
Primer Amorces aléatoires, Oligo amorces dT
Quantité 50 rxns
Transcriptase inverse SuperScript II
Shipping condition (Condition d'expédition) Glace humide
À utiliser avec (application) RT-PCR
Type de produit final ADNc simple brin
Nb de réactions 50 réactions
Format de réaction Composants distincts
Type de réactif Transcription inverse
Taille (produit final) Jusqu’à 12 kb
Matériau de départ ARN
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Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser dans des procédures de diagnostic.