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Invitrogen™ GeneRacer™ Kit avec AMV RT et TOPO TA Cloning™ kit pour le séquençage

Numéro de catalogue. L150001
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Numéro de catalogue. L150001 Fournisseur Invitrogen™ Code fournisseur L150001

Description

Technique avancée RACE (amplification rapide des extrémités d'ADNc) qui améliore l'efficacité de l'amplification des extrémités cDNA de 5' et 3' de longueur complète

Le GeneRacer kit est disponible avec SuperScriptIII Reverse Transcriptase (RT) pour une meilleure amplification de l'extrémité complète de 5' à partir d'un ARNm long et complexe. La portion RNase H de SuperScriptIII RT a été mutée pour éviter la fendre de l’ARNm lors de la synthèse de l’ADNc. Cela augmente la taille et le rendement de l’ADNc. SuperScriptIII RT est plus thermostable que les RT de type sauvage. Cela permet la transcription inverse à des températures plus élevées, relâche la structure secondaire des modèles complexes et permet à la synthèse de l’ADNc d’atteindre son achèvement.

  • Générez de l’ADNc à partir de transcriptions d’au moins 10 kb de longueur
  • Obtenir l'extrémité complète de 5' des transcrits rares à moins de 30 exemplaires par cellule
  • Clonez les extrémités complètes de 5' et 3' pour construire une séquence complète d'ADNc.

  • Garantit que seuls les transcripts contenant des extrémités d’ADNc de longueur complète sont amplifiés (1,2)
  • Le protocole avancé commence au niveau de l'ARN en ciblant spécifiquement uniquement l'ARNm atteint de 5'
  • Aux étapes suivantes, la capsule est retirée et remplacée par GeneRacer de l’ARN Oligo
  • Lors de la transcription inverse, GeneRacer la séquence d’ARN Oligo est incorporée dans l’ADNc
  • Seul l’ADNc complètement transcrit à l’envers contiendra cette séquence connue
  • La PCR 5' RACE est ensuite réalisée à l'aide GeneRacer d'amorce 5' spécifique à la GeneRacer séquence d'ARN Oligo et à l'amorce spécifique au gène
  • Le résultat est de l'ADN amplifié qui contient la séquence d'ADNc de 5' de longueur complète
  • Pour démontrer la capacité de GeneRacer Kit à capturer l’extrémité cDNA 5fi pleine longueur, les extrémités 5fi des gènes dont les sites de départ transcriptionnel sont connus ont été amplifiées
  • En commençant par l’ARN total et en suivant GeneRacer le protocole, les longs transcrits (10 kb) et les messages rares présents à 0,01%, soit 30 copies par cellule ont été amplifiés

Clonage, PCR et PCR en temps réel, transcription inverse, bibliothèques d’ADNc et construction de bibliothèques

Spécifications

Bacterial or Yeast Strain TOP10
Cloning Method TOPO TA
Content And Storage Chaque GeneRacer™ kit contient la GeneRacer™ boîte, une boîte RT, S.N.A.P. ™ des colonnes et un TOPO™ kit de clonage. La GeneRacer™ boîte RT et la boîte RT contiennent suffisamment de réactifs pour cinq réactions d’ADNc, plus une réaction témoin et des amorces pour 50 réactions PCR. Sont inclus dans la GeneRacer™ boîte les enzymes CIP, TAP, T4 ligase ARN, et leurs tampons, l’ARN GeneRacer™ Oligo (pré-aliquoté et lyophilisé), GeneRacer™ les amorces et amorces imbriquées, RNaseOUT™ l’inhibiteur de la ribonucléase recombinante, le phénol/chloroforme, le glycogène de moule, l’eau stérile et les témoins. Conserver à -20 °C. La SuperScript™ boîte III RT comprend SuperScript™ le III RT, le tampon 5X à première brin, la DTT, la RNase H, les amorces aléatoires, l’amorce GeneRacer™ Oligo dT et le mélange dNTP. Conserver à -20 °C. La boîte Cloned AMV RT comprend un clone AMV RT, un tampon RT 5X, des amorces aléatoires, l’amorce GeneRacer™ Oligo dT et un mélange dNTP. Conserver à -80 °C. Un sac séparé contient dix S.N.A.P. ™ colonnes de purification en gel pour les produits PCR purifiant le gel. Entreposez le produit à température ambiante. Le kit de clonage à 10 réactions TOPO™ pour le séquençage contient deux boîtes. Stockez la TOPO™ boîte de clonage à -20 °C. Conservez la boîte d’E. coli compétente à -70 °C. Tous les réactifs sont garantis stables pendant 6 mois lorsqu’ils sont correctement stockés.
Format Équipement
For Use With (Application) Transcription inverse
Includes Chaque GeneRacer kit contient la GeneRacer boîte, une boîte RT, S.N.A.P. des colonnes et un TOPO kit de clonage. La GeneRacer boîte RT et la boîte RT contiennent suffisamment de réactifs pour cinq réactions d’ADNc, plus une réaction témoin et des amorces pour 50 réactions PCR. Sont inclus dans la GeneRacer boîte les enzymes CIP, TAP, T4 ligase ARN, et leurs tampons, l’ARN GeneRacer Oligo (pré-aliquoté et lyophilisé), GeneRacer les amorces et amorces imbriquées, RNaseOUT l’inhibiteur de la ribonucléase recombinante, le phénol/chloroforme, le glycogène de moule, l’eau stérile et les témoins. Conserver à -20 °C. La boîte SuperScript III RT inclut SuperScript III RT, le tampon 5X de première brin, la DTT, la RNase H, les amorces aléatoires, l’amorce GeneRacer Oligo dT et le mélange dNTP. Conserver à -20 °C. La boîte Cloned AMV RT comprend un clone AMV RT, un tampon RT 5X, des amorces aléatoires, l’amorce GeneRacer Oligo dT et un mélange dNTP.
Product Line GeneRacer, TA Cloning, TOPO
Product Type Kit de clonage
Quantity 1 kit
Vector pCR4-TOPO TA

Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser dans des procédures de diagnostic.