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Invitrogen™ BLOCK-iT™ Kit de vecteurs d’expression ARNi Pol II miR
Description
Comprend
Le kit de vecteurs d’expression ARN BLOCK-iT™ Pol II miR contient deux boîtes. La boîte de clonage contient pcDNA™ linéarisé 6,2-GW/miR, un tampon de recuit 10X, T4 une ligase d’ADN, un tampon de ligature ADN 5X, un oligo de contrôle lacZ, un plasmide de contrôle lacZ, un plasmide contrôle négatif, de l’eau sans DNase/RNase, ainsi que des amorces de séquençage avant et en arrière.
Le vecteur pcDNA™6,2-GW/miR inclus dans le BLOCK-iT kit d’expression de l’ARN Pol II miR est conçu pour exprimer des miARN artificiels conçus pour avoir une homologie de 100% avec votre séquence cible et qui entraîneront un clivage de la cible. Ce vecteur inclut des séquences de flanc et de boucles provenant d’un miARN endogène qui dirige l’excision du miARN modifié d’un transcript Pol II plus long (pré-miARN). En utilisant Invitrogen's un RNAi Designer primé BLOCK-iT , plus de 70% des constructions produisent plus de 70% de knockdown. L’expression Pol II des miARN modifiés permet :
- Forte expression du promoteur précoce immédiat du CMV, avec la possibilité d’utiliser des promoteurs spécifiques aux tissus ou d’autres régulations via la recombinaison multiSite Gateway™
- Compatibilité avec de nombreux Invitrogen's vecteurs Gateway destination (DEST) pour l’expression génique; y compris les vecteurs lentiviraux pour la transduction stable des types cellulaires en division, non divisés et primaires, le système d’intégration Flp-In™ chromosomique à site unique, et des constructions alternatives de fusion de rapporteurs
- L’expression de plus d’un miARN modifié sur le même transcript, permettant la mise en échec de plusieurs gènes simultanément et la génération de phénotypes synthétiques
Pour des niveaux élevés d’expression de votre séquence miR RNAi, le vecteur pcDNA6.2-GW/miR inclut le promoteur CMV. Il suffit d’entrer un numéro d’accession RefSeq ou une séquence nucléotidique dans le concepteur d’ARN en ligne BLOCK-iT gratuit, et le logiciel concevra des miARN optimisés ayant une homologie de 100% avec la cible d’intérêt. Clonez le miARN dans le vecteur à l’aide d’un protocole de ligature rapide et transfectez pour une expression immédiate du miARN. Les miARN exprimés sont traités par la machinerie cellulaire endogène du noyau (y compris Drosha) puis transportés dans le cytoplasme où ils sont ensuite traités par Dicer. Le miARN entièrement traité est ensuite incorporé dans RISC où il agit comme un siRNA et entraîne le clivage de la cible d’ARNm.
Pour une variété d’options d’expression, la cassette de miARN, les régions flancantes de miR et un miARN homologue à la cible d’intérêt peuvent être facilement déplacés dans une variété de vecteurs DEST. Cela se produit par des réactions de recombinaison Gateway où la cassette miARN est transférée dans un pDONR™ vecteur (réaction BP) puis dans un vecteur DEST (réaction LR) de son choix.
Clonage, clonage passerelle, ARNi, ARNi, épigénétique et recherche sur l’ARN non codant, ARN à base de vecteurs
Spécifications
Spécifications
| Type de produit | Kit de vecteurs d’expression ARNi |
| Contenu et stockage | Le kit de vecteurs d’expression ARN BLOCK-iT™ Pol II miR contient deux boîtes. La boîte de clonage contient pcDNA™ linéarisé 6,2-GW/miR, un tampon de recuit 10X, T4 une ligase d’ADN, un tampon de ligature ADN 5X, un oligo de contrôle lacZ, un plasmide de contrôle lacZ, un plasmide contrôle négatif, de l’eau sans DNase/RNase, ainsi que des amorces de séquençage avant et en arrière. Stockez les vecteurs, tampons, oligo-olicus et plasmides de contrôle, l’eau et les amorces de séquençage à -20 °C. La boîte One Shot™ contient des réactifs de transformation, dont vingt-et-un aliquotes de 50-l μ de One Shot™ TOP10 Chemically Competent E. coli, un milieu S.O.C. et un plasmide de contrôle superenroulé pUC19. Stockez ces réactifs de transformation à -80 °C. Tous les réactifs sont garantis stables pendant 6 mois lorsqu’ils sont correctement stockés. |
| Méthode de clonage | Gateway™ |
| Système constitutif ou inductible | Constitutif |
| Type de livraison | Transfection |
| Type d’ARNi | ARNmi |
| Agent de sélection (Eucaryote) | Blasticidine |
| Vector | BLOCK-iT Vecteurs ARNi |
| Promoteur | CMV |
| Format | Équipement |
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Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser dans des procédures de diagnostic.