Thermo Scientific™ Pierce™ Trousse de test de protéase fluorescente

Ces kits de test colorimétrique et fluorescent de protéase comprennent deux méthodes différentes pour mesurer l’activité totale des protéases dans des échantillons biologiques. Les deux kits peuvent être utilisés pour évaluer l’avancement des procédures de purification des protéases ou pour quantifier la contamination par des protéases dans des échantillons de protéines. Les kits utilisent de la caséine succinylée ou marquée à la fluorescéine comme substrat de protéase. La protéolyse du substrat donne des peptides dont les groupes aminés ou les propriétés de fluorescence modifiées permettent la détection dans les kits respectifs. L’activité des protéases est quantifiée par comparaison avec la norme trypsine incluse dans chaque kit.

Points clés :

• Le substrat – de caséine mesure l’activité de toute protéase qui clissonne la caséine en fragments peptidiques
• La norme – de la trypsine quantifie l’activité des protéases par rapport à la trypsine, une référence universellement acceptée
• Sensible – 1000 fois plus sensible que les tests utilisant des formes non modifiées de caséine
• Des protocoles simples et rapides – pour tube à essai et microplaques sont complétés en moins d’une heure
• Étapes d’addition homogènes – seulement; pas besoin d’étapes de séparation, de transfert ou d’arrêt
• Personnalisable – facilement pour adapter le temps, la température et le pH afin d’optimiser la sensibilité aux protéases d’intérêt

Le kit de test de protéase colorimétrique (Partie no 23263) utilise de la caséine entièrement succinylée comme substrat pour le test. L’hydrolyse de ce substrat en présence de protéase entraîne la libération de fragments peptidiques avec des groupes amino-terminaux libres. Ces peptides sont réagis avec de l’acide sulfonique trinitrobenzène (TNBSA), suivi d’une mesure de l’augmentation de l’absorbance résultant de la formation d’adducts peptidiques TNB de couleur jaune.

• Substrat : caséine succinylée (non disponible séparément)
• Base du test : détection des amines primaires résultant de la protéolyse
• Réactif de détection : acide sulfonique trinitrobenzène (TNBSA)
• Mesure : absorbance à 450 nm (lecteur de plaques ou spectrophotomètre)

Le kit de test de protéase fluorescente (Partie no 23266) inclut la caséine marquée à la fluorescéine comme substrat pour évaluer l’activité des protéases dans un échantillon, soit par transfert d’énergie par résonance de fluorescence (FRET) avec un fluoromètre standard, soit par polarisation de fluorescence (FP) avec instrumentation performante. La caséine FTC est une caséine native qui a été marquée à l’aide d’un gros excès molaire d’isothiocyanate de fluorescéine (FITC). Les propriétés de fluorescence de ce substrat protéique fortement marqué et intact changent considérablement lors de la digestion par les protéases, ce qui donne une indication mesurable de la protéolyse.

• Substrat : caséine marquée à la fluorescéine (FITC-caséine); disponible séparément sous le numéro de partie 23267
• Base de l’analyse : variation de la résonance de fluorescence (FRET) ou de la polarisation de fluorescence (FP)
• Mesure : instrument avec filtres d’excitation et d’émission à fluorescéine (485/538 nm)

Comprend :

Caséine modifiée, trypsine standard et solution physiologique tamponnée (les deux kits); Solution TNBSA (Partie no 23263 seulement)

Recommandé dans les domaines suivants :

Évaluer l’intégrité fonctionnelle et les progrès globaux de la purification des protéases; Quantifier la contamination par des protéases dans les échantillons de protéines; Caractériser l’activité des protéases inhabituelles comparée à la trypsine; Évaluer les conditions tampons pour leurs effets sur la fonction et l’activité de la protéase