Thermo Scientific™ Pierce™ Dilution-Free™ Test rapide des protéines d’or BCA

Le kit de test protéique Pierce Dilution-Free Rapid Gold BCA est un test simple, rapide et précis, optimisé pour déterminer la concentration totale en protéines. Il est compatible avec les détergents et a une plage dynamique 5 fois plus large que les tests protéiques traditionnels de 0,02 –à 10 mg/mL. Cette large plage dynamique élimine la nécessité de diluer la plupart des échantillons pour les amener dans la plage de l’analyse.

De plus, le Dilution-Free test protéique rapide d’or BCA est accompagné d’un ensemble de sept standards de protéines BSA pré-dilués, emballés dans une bande de tubes compatible avec la pipette multicanal, donc aucune dilution en série n’est requise. La barrette de tubes comprend un seul tube vide qui permet aux utilisateurs d’ajouter leur propre tampon d’échantillonnage afin de procéder à la soustraction du blanc. Le Dilution-Free porte-bande à tubes (Cat. Non. A57184) permet une manipulation facile sur le banc.

Les caractéristiques du Dilution-Free kit de test protéique Rapid Gold BCA incluent :

• L’absence—de dilution élimine le besoin d’échantillons et de dilutions de courbe standard, réduisant le temps de montage jusqu’à 80%
• Temps—d’analyse court : réaction à température ambiante de cinq minutes
• Plage de travail linéaire à large plage—d’essai pour la BSA de 20 à 10 000 μg/mL
• Uniform—présente une variation protéine à protéine similaire à l’analyse protéique traditionnelle BCA et moins de variation protéine à protéine que les méthodes de liaison protéique (Bradford)
• Compatible—, non affecté par les concentrations typiques de la plupart des détergents ioniques et non ioniques
• Absorbance colorimétrique—optimale à 480 nm
• Précis—2 fois plus précis que les tests de Bradford

Le kit d’analyse rapide des protéines en or BCA Pierce Dilution-Free utilise la même technologie de chélation du cuivre que le célèbre test traditionnel de protéine Pierce BCA et offre une précision comparable, mais avec une incubation de cinq minutes à température ambiante et mesurée à 480 nm. Cette amélioration élimine le besoin d’effectuer des dilutions en série ou d’échantillons, de subir une longue période d’incubation ou d’exposer les échantillons à des températures élevées, ce qui permet d’obtenir des résultats plus rapidement.

Le test protéique traditionnel BCA est un test protéique largement utilisé et accepté, reconnu pour sa détermination très précise de la concentration en protéines et sa compatibilité avec la plupart des types d’échantillons rencontrés dans la recherche sur les protéines. Cependant, pour développer les échantillons selon ce protocole traditionnel, il faut soit chauffer la réaction à 37 °C pendant 30 minutes, soit permettre un développement à température ambiante pendant deux heures. Le Dilution-Free test protéique rapide de l’or BCA conserve les caractéristiques clés du test traditionnel BCA mais permet une incubation rapide à température ambiante et à temps équivalente aux méthodes de liaison au colorant.

Le Dilution-Free test rapide d’or BCA peut être utilisé pour évaluer les rendements dans les lysats cellulaires entiers et les fractions de colonnes d’affinité, ainsi que pour surveiller la contamination aux protéines dans des applications industrielles. À l’instar du test traditionnel BCA , le Dilution-Free test rapide sur l’or BCA est beaucoup moins affecté que les méthodes de liaison aux colorants par des différences de composition protéique, ce qui offre une faible variation protéine à protéine.

Comment le Dilution-Free test protéique rapide de l’or BCA détecte les protéines

Le Dilution-Free test protéique rapide de l’or BCA utilise la même méthode de réduction du cuivre que le test protéique traditionnel BCA avec un chélateur unique au cuivre. Le test combine la réduction bien connue de Cu2+ en Cu1+ par les protéines dans un milieu alcalin avec la détection colorimétrique hautement sensible et sélective du cation cuprous (Cu1+) par le chélateur propriétaire. La première étape consiste à chéler le cuivre avec des protéines dans un environnement alcalin pour former un complexe vert clair. Dans cette réaction, connue sous le nom de réaction au biuret, les peptides contenant trois résidus d’acides aminés ou plus forment un complexe chélaté coloré avec des ions cuivriques dans un environnement alcalin contenant du tartrate de sodium et de potassium.

Lors de la deuxième étape de la réaction de développement de la couleur, le Dilution-Free chélateur Rapid Gold BCA réagit avec le cation réduit (cuprous) formé à la première étape. Le produit réactionnel intense de couleur dorée résulte de la chélation de deux molécules de BCA avec un ion cuprous. Le complexe BCA/cuivre est soluble dans l’eau et présente une forte absorption linéaire à 480 nm avec des concentrations croissantes de protéines. Le complexe est environ 100 fois plus sensible (limite inférieure de détection) que la couleur vert pâle de la première réaction.

La réaction qui conduit à la formation de la couleur est fortement influencée par quatre résidus d’acides aminés (cystéine, cystine, tyrosine et tryptophane) dans la séquence d’acides aminés de la protéine. Cependant, contrairement aux Coomassie méthodes de liaison aux colorants (c’est-à-dire Bradford), la colonne vertébrale peptidique universelle contribue aussi à la formation des couleurs, aidant à minimiser la variabilité causée par les différences de composition des protéines.

Compatibilité du Dilution-Free test protéique rapide de l’or BCA

Certaines substances sont connues pour interférer avec le Dilution-Free test rapide des protéines d’or BCA , y compris celles ayant un potentiel réducteur, des agents chélants et des acides ou bases fortes. Comme elles sont connues pour interférer avec l’estimation des protéines même à des concentrations minimes, il faut éviter les substances suivantes comme composants du tampon de l’échantillon :

• Acide ascorbique
• EGTA
• Fer
• Saccharose impur
• Catécholamines
• Glycérol impur
• Lipides
• Tryptophane
• Créatinine
• Peroxyde d’hydrogène
• Melibiose
• Tyrosine
• Cystéine
• Hydrazides
• Rouge phénol
• Acide urique
• TCEP
• Thimérosal
• 2-mercaptoéthanol

Porte-bande à tubes Pierce Dilution-Free

Le support de bande à tubes Pierce Dilution-Free est un support en mousse réutilisable destiné aux normes protéiques Pierce Dilution-Free BSA et est inclus dans la taille d’essai de 20 mL du kit de test protéique Pierce Dilution-Free Rapid BCA Gold. Il est également disponible à la vente séparément. Les concentrations standard de protéines sont imprimées sur le support Tubestrip pour une référence facile et pour le pipetage sur le banc.