Thermo Scientific™ Pierce™ BCA Kits de dosage des protéines

La trousse de dosage des protéines Pierce BCA est un test de haute précision, compatible avec les détergents, permettant de déterminer la concentration en protéines. Les réactifs Pierce BCA permettent de déterminer avec précision la concentration en protéines pour la plupart des types d'échantillons rencontrés dans la recherche sur les protéines. Le test Pierce BCA peut être utilisé pour évaluer les rendements dans des lysats cellulaires complets, des fractions de colonnes d’affinité, des échantillons de protéines purifiées, ainsi que pour surveiller la contamination protéique dans les applications industrielles. Par rapport à la plupart des méthodes de liaison des colorants, le test BCA est beaucoup moins sensible aux différences de composition protéique, ce qui lui confère une plus grande précision en termes de concentration.

Des options de kits sont disponibles, notamment le Pierce Dilution-Free BSA Protein Standards (Normes de protéines BSA), qui comprend un ensemble de sept étalons BSA prédilués, conditionnés dans une barrette de tubes adaptée aux pipettes multicanaux.  La barrette de tubes comprend un seul tube vide qui permet aux utilisateurs d’ajouter leur propre tampon d’échantillonnage afin de procéder à la soustraction du blanc.

Les caractéristiques du BCA kit de dosage des protéines sont les suivantes :

• Estimation—colorimétrique visuelle ou mesure à l’aide d’un spectrophotomètre standard ou d’un lecteur de plaques à 562 nm
• Précis,—présente la moitié de la variation d’une protéine à l’autre observée avec les méthodes de lien avec un colorant (de Bradford)
• Compatibilité—non affectée par les concentrations typiques de la plupart des détergents ioniques et non ioniques
• Temps de test court—incubation de 30 minutes; beaucoup plus facile et quatre fois plus rapide que les méthodes Lowry classiques
• Large plage d’analyse—plage de travail linéaire pour la BSA de 20 à 2 000μ g/mL
• Sensibilité—détectable jusqu’à 5μ g/ml avec un protocole amélioré
• Plus besoin de dilutions en série— les options du kit comprennent Dilution-Free des étalons protéiques BSA qui éliminent la nécessité d’effectuer des dilutions en série lors de la génération d’une courbe étalon

Comment fonctionne le test

Le BCA test de protéines associe la reduction bien connue de Cu²⁺ to Cu¹⁺ par les protéines dans un milieu alcalin avec la détection colorimétrique hautement sensible et sélective du cation cuivreux (Cu¹⁺) par l’acide bicinchoninique (BCA). La première étape consiste à chélater le cuivre avec des protéines dans un environnement alcalin afin de former un complexe bleu clair. Dans cette réaction, connue sous le nom de réaction au biuret, les peptides contenant trois résidus d’acides aminés ou plus forment un complexe chélaté coloré avec des ions cuivriques dans un environnement alcalin contenant du tartrate de sodium et de potassium.

Dans la deuxième étape de la réaction de développement de la couleur, BCA réagit avec le cation réduit (cuivreux) qui s’est formé lors de la première étape. Le produit de réaction de couleur pourpre intense résulte de la chélation de deux molécules de BCA avec un ion cuivreux. Le complexe BCA/cuivre est soluble dans l’eau et présente une forte absorbance linéaire à 562 nm lorsque les concentrations en protéines augmentent. Le complexe est environ 100 fois plus sensible (limite inférieure de détection) que la couleur bleu pâle de la première réaction.

La réaction est fortement influencée par quatre résidus d’aminoacides (cystéine, cystine, tyrosine et cherptophane) dans la séquence d’aminoacides de la protéine. Cependant, contrairement Coomassie aux méthodes de liaison des colorants (c'est-à-dire Bradford), le squelette peptidique universel contribue également à la formation de la couleur, ce qui permet de minimiser la variabilité causée par les différences de composition des protéines.