Thermo Scientific™ Kit Active Ras Pull-Down et Détection

Les kits actifs de tirage vers le bas et de détection de GTPase mesurent l’activation de petites GTPases en les isolant via leurs effecteurs spécifiques en aval. Des kits spécifiques pour les GTPases Arf1, Arf6, Cdc42, Rac1, RalA, Rap1, Ras et Rho GTPases sont offerts. Le domaine de liaison correspondant de l’effecteur en aval pour chaque petite GTPase s’exprime sous forme de protéine de fusion GST. Lorsqu’elle est immobilisée sur une résine, cette protéine de fusion est utilisée pour tirer vers le bas la GTPase active (c’est-à-dire liée au GTP). L’étape de purification par affinité par tirage vers le bas s’effectue facilement et facilement à l’aide de colonnes de spin de microcentrifuge. Après une simple étape de lavage, la GTPase liée est récupérée en éluant la protéine de fusion GST de la résine glutathion à l’aide du tampon de chargement d’échantillons SDS-PAGE. La GTPase purifiée est ensuite détectée par Western blot à l’aide d’un anticorps spécifique fourni dans chaque kit.

Chaque kit GTPase comprend la protéine de fusion GST du domaine de liaison spécifique, les activateurs GTPγS et GDP, la résine agarose glutathion, le tampon lyse-liaison-lavage, un anticorps primaire, un tampon d’échantillon SDS 2X, des colonnes de spin et des tubes de collecte. Chaque kit contient suffisamment de composants pour 30 essais à tirage vers le bas. Les kits sont optimisés pour la détection du Western blot avec un anticorps secondaire conjugué à HRP (Partie no 31460, lapin; Partie no 31430, souris) utilisant Thermo Scientific SuperSignal™ le substrat chimiluminescent West Pico (Partie no 34080).

Points clés :

• Des réactifs optimisés à haute sensibilité et précision –, des anticorps spécifiques et la procédure Western blot assurent des contrôles précis et des résultats quantitatifs

• Commodité – : pas besoin d’exprimer et purifier vos propres protéines de fusion GST-PBD ou RBD, ni d’utiliser des résines d’affinité d’immunoprécipitation à base d’anticorps coûteuses

• Incubation simultanée accélérée – du lysat cellulaire avec GST-PBD ou RBD et la résine de glutathion directement dans une colonne de spin de microcentrifuge haute performance

• Les réactifs facilités d’utilisation – et les conditions de tirage vers le bas ont été optimisés pour un succès immédiat, même pour les utilisateurs débutants

• Efficacité – Les colonnes de rotation de microcentrifuge et les tubes de collecte assurent une séparation efficace du liquide et de la résine, évitant la perte d’échantillons

• Les kits complets – comprennent des réactifs pour la purification d’affinité ainsi que des témoins, un tampon de lyse cellulaire compatible et un anticorps primaire spécifique pour la détection finale du Western blot

GST protéines de fusion des domaines actifs de liaison à la GTPase :

• Le domaine de liaison Ras de Raf1 (Raf1-RBD) lie les Ras actifs
• Le domaine de liaison p21 Pak1 (Pak1-PBD) lie Rac1 actif et Cdc42
• Le domaine de liaison Rho de Rhotekin (Rhotekin-RBD) se lie à Rho actif
• Le domaine de liaison Rap1 de RalGDS (RalGDS-RBD) lie le Rap1 actif
• Le domaine de liaison protéique GGA3 (GGA3-PBD) se lie aux Arf1 et Arf6 actifs
• La protéine de liaison Ral 1 (RalBP1) se lie au RalA actif

Comprend :

GST protéine de fusion du domaine de liaison spécifique, résine d’agarose glutathione, GTPγS et GDP (100X), tampon lyse-liaison-lavage, anticorps primaire spécifique GTPase, tampon d’échantillonnage SDS-PAGE (2X), colonnes de spin et tubes de collecte