Molecular Probes™ pHrodo™ Facteur de croissance épidermique rouge et vert (EGF) et pHrodo™ conjugués de transferrine rouge

Les pHrodo conjugués du facteur de croissance épidermique rouge et pHrodo vert (EGF) consistent en pHrodo un colorant rouge ou pHrodo vert directement conjugué à une molécule humaine recombinante d’EGF hautement active et sont utilisés pour la détection du récepteur EGF internisé dans les cellules. L’EGF marqué fluorescentement a permis aux scientifiques d’étudier les interactions récepteur-membrane, d’étudier la distribution des récepteurs, de calculer les constantes de vitesse pour l’interaction de l’EGF avec son récepteur, et plus encore. Les marquants fluorescents qui réagissent à un changement de pH ajoutent un autre niveau de détection.

pHrodo Le conjugué de transferrine rouge est constitué d’un pHrodo colorant rouge directement conjugué à une molécule de transferrine très active et est utilisé pour la détection de la transferrine internalisée dans les cellules. La transferrine est une glycoprotéine sérique monomérique (∼80 000 daltons) qui se lie à un récepteur spécifique à la surface des cellules vertébrées et délivre jusqu’à deux atomes de Fe³⁺ via une endocytose médiée par récepteur. Une fois que les protéines transférrines transportant le fer sont à l’intérieur des endosomes, l’environnement acide favorise la dissociation du fer du complexe récepteur de la transferrine –. Après la libération du fer, l’apotransférrine est recyclée vers la membrane plasmique, où elle est libérée par son récepteur pour récupérer plus de fer.

Les colorants rouges et pHrodo verts, très photostables pHrodo, sont faiblement fluorescents à l’extérieur des cellules à pH neutre, mais lorsqu’ils sont internisés spécifiquement par l’endocytose EGF ou la transferrine, ils deviennent vivement fluorescents dans les endosomes acides. Cela permet la mesure de l’EGF ou de la transférrine internalisée, ainsi que la surveillance dynamique de l’internalisation de l’EGF ou de la transferrine dans les cellules vivantes.

Le conjugué pHrodo EGF rouge et le pHrodo conjugué de transferrine rouge ont des spectres d’excitation/émission de 560/585 nm et peuvent être multiplexés avec une grande variété de colorants bleu, rouge et rouge lointain tels que Mitosox Red, CellEvent Caspase 3/7 Red, NucBlue, RFP et Mitotracker Deep Red, entre autres. Le pHrodo conjugué EGF vert possède des spectres d’excitation/émission de 509/533 nm et peut être multiplexé avec une grande variété de colorants bleu, rouge et rouge lointain tels que Mitosox Red, CellEvent Caspase 3/7 Red, NucBlue, RFP et Mitotracker Deep Red, entre autres.

Les pHrodo conjugués EGF rouge et pHrodo vert ainsi que le pHrodo conjugué à transfert rouge sont compatibles dans des applications telles que la microscopie à fluorescence traditionnelle, le criblage à haute teneur (HCS), la cytométrie en flux et la fluorimétrie à microplaques ou le criblage à haut débit (HTS). Les conjugués sont également compatibles avec divers microscopes à fluorescence large champ ou confocaux, cytomètres à flux, lecteurs de plaques à fluorescence et instruments à haute teneur.