Invitrogen™ Click-iT™ Kit de capture d’ARN naissant, pour l’analyse de l’expression génique

Le Click-iT kit de capture d’ARN naissant utilise une chimie propriétaire Click-iT pour capturer avec une grande efficacité et sensibilité des ARN nouvellement créés. Grâce à cette Click-iT approche, des études sur l’analyse à haute résolution de la régulation génique peuvent être réalisées, ainsi que la régulation de l’ARN, la stabilité de l’ARN, la synthèse de l’ARN, la désintégration et la dégradation de l’ARN, la régulation transcriptionnelle, le delta/delta C(t), la propagation et la fuite nucléaire et plus encore. Les homologues ribonucléotidiques de l’éthylène uridine (EU) contenant un groupe réactif alkyne sont transmis aux cellules ou aux tissus. Une fois incorporées, les cellules sont lysées et l’ARN isolé. On clique sur une azide “ ” de biotine, puis des billes magnétiques de strepavidine sont utilisées pour capturer le pool d’ARN nouvellement synthétisé. Les ARN capturés sont ensuite amplifiés et les ADNc résultants sont utilisés dans de nombreuses méthodologies post-capture. Nous l’avons validé pour les réseaux (à haute et faible densité), le séquençage et SOLiD™ l’analyse delta CT basée sur qPCR ou SYBR™ sur l’un ou TaqMan™ l’autre. Il ne faut que seulement 25 000 cellules pour l’analyse des nouveaux transcrits induits. Le kit permet 40 conditions pour l’étiquetage et la capture, qui peuvent ensuite être divisées en 400 tests analytiques distincts. Avec un prix d’environ un dollar l’assis, c’est parfait pour les chercheurs dans le milieu universitaire et industriel. Le réactif EU à la concentration recommandée de 200 μM est bien toléré par les cellules. Dans un écran en réseau de plus de 32 000 gènes, seuls les changements les plus mineurs dans 12 par rapport à un véhicule de contrôle ont pu être détectés. De plus, à la concentration initiale d’alimentation 5 fois supérieure à ce que nous recommandons (200 μM contre 1,0 mM), il n’y avait aucun effet sur un panel de gènes de ménage, ni sur la capacité des cellules à proliférer normalement. La sensibilité et la fiabilité ont été confirmées dans un réseau à faible densité (TLDA™) de gènes apoptotiques. Le pool naissant capturé a trouvé avec précision tous les transcripts apoptotiques (induits par la stauroporine) précédemment caractérisés, sans aucun changement détectable dans l’information de séquence.

• Moins dangereux

La découverte, pas seulement la récupération. Les efforts génomiques des dernières décennies ont révélé que seulement 2% de l’humain code une protéine, laissant 98% du génome humain comme l’Unknome. La découverte du but et des motifs d'expression de ce vaste réservoir de séquences inconnues sera grandement facilitée dans la transcriptomique de cette décennie par cette nouvelle approche.

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