Invitrogen™ Un Shot™ Stbl3™ E. coli chimiquement compétent

L’E. coli Stbl3 One Shot Chimiquement compétent est conçue pour cloner des répétitions directes trouvées dans les vecteurs d’expression lentivirale, car ces cellules réduisent la fréquence de la recombinaison homologue des répétitions directes présentes dans les vecteurs lentiviraux (ViraPower kits d’expression lentivirale) et d’autres vecteurs rétroviraux (plasmides à base du VIH sujets à l’instabilité). La Stbl3 souche a été essentielle pour de nombreuses applications, notamment l’édition du génome, les flux de travail CRISPR, le développement de vaccins (y compris la recherche sur le vaccin contre le SARS-CoV-2), le clonage et le maintien de vecteurs avec plusieurs répétitions (par exemple, une protéine codante génétique avec séquence répétée). L’efficacité de transformation des cellules chimiquement compétentes en One Shot Stbl3 est >de 1 x 10⁸ cfu/μg d’ADN plasmidique.

La Stbl3 souche est dérivée de la souche HB101 E. coli avec un génome hybride de souche K-12 et B. Il contient l’allèle recA13 de la mutation recA qui réduit l’occurrence de la recombinaison non spécifique dans l’ADN cloné. Les mutations dans le Stbl3 système de restriction dépendant de la méthylation (mcrB, mrr  et hsdS20) permettent la construction d’ADN génomique de clonage. Cette souche possède l’extrémitéA1+, une endonucléase non spécifique I qui digère l’ADN. La Stbl3 souche produit également de façon reproductible plus d’ADN plasmidique que les souches DH (10 fois plus d’ADN plamsmid que la TOP10 souche) et produit de façon durable un lentivirus à haut titre.

Offre d’E. coli chimiquement compétente en un seul Stbl3 coup :
• Efficacité attendue de >1 x 10⁸ transformants/μg d’ADN
• plasmidique Performance optimale pour la propagation de vecteurs lentiviraux et le maintien de répétitions•
directes Capacité accrue de clonage génomique de l’ADN (mcrB, mrr et hsdS20)
• Capable de produire des rendements 

élevés en ADN Note : Pour une performance optimale et pour maintenir le plasmide avec des séquences répétées complexes, Stbl3 les cellules doivent être cultivées à 30 °C. Lors de l’isolement de l’ADN plasmidique provenant de Stbl3 cellules contenant une endonucléase de type sauvage I (extrémitéA1+), assurez-vous que les tampons contiennent 10 mM d’EDTA. L’EDTA va inactiver l’endonucléase et éviter l’entaille de l’ADN et la dégradation des vecteurs (suivre les instructions du kit de purification de l’ADN plasmidique pour les souches terminales A1+ d’E. coli).

Format
Stbl3 One Shot facile à utiliser Des cellules E. coli chimiquement compétentes sont fournies en format pratique à réaction unique. Le format à tube unique, à usage unique, permet que toutes les étapes du protocole de transformation, jusqu’au placage, se déroulent dans le même tube, ce qui aide ainsi à gagner du temps et à prévenir la contamination.

Génotype
F^–mcrB mrr hsdS20(_{r B}–, m_B–) recA13 supE44 ara-14 galK2 lacY1 proA2 rpsL20(StrR) xyl-5λ – leu mtl-1

Trouvez la souche et le format qui correspondent à vos besoins
• D’autres souches STBL sont disponibles avec des origines génétiques différentes.
• La Stbl3 déformation est disponible en MultiShot format pour des applications à haut débit.