Invitrogen™ GeneSwitch™ Kit d’expression mammifère, kit complet

• Le vecteur d’expression pGene/V5-His fournit un promoteur minimal, GAL4-E1b, composé de sites de liaison pour la protéine de liaison à l’ADN Gal4 de la levure, suivis de la séquence TATA du promoteur adénovirus E1b
• Sans facteurs supplémentaires, le promoteur GAL4-E1b est transcriptionnellement silencieux
• Pour activer la transcription à partir du promoteur GAL4-E1b, GeneSwitch une protéine régulatrice est exprimée à partir du promoteur TK minimal sur le vecteur pSwitch
• GeneSwitch La protéine possède trois domaines fonctionnels : Domaine de liaison à l’ADN Gal4 (Gal4-DBD) pour lier la protéine régulatrice au promoteur GAL4-E1b; Domaine de liaison du ligand du récepteur de progestérone humain tronqué (hPR-LBD) qui subit un changement conformationnel lorsqu’il se lie à l’antagoniste de la progestérone, la mifépristone; Domaine d’activation de la transcription à partir du facteur de transcription NF ØB p65 (p65AD) pour activer la transcription à partir du promoteur silencieux GAL4-E1b
• En l’absence de mifépristone, la conformation de la région hPR-LBD empêche GeneSwitch la protéine régulatrice d’activer la transcription du promoteur GAL4-E1b
• Lorsque la mifépristone est ajoutée et se lie à la région hPR-LBD, GeneSwitch la protéine régulatrice prend une conformation permettant de stimuler la transcription à partir du promoteur GAL4-E1b
• L’induction du GeneSwitch système conduit à l’activation du gène d’intérêt sur le vecteur pGène/V5-His
• De plus, quatre sites de liaison Gal4 en amont du promoteur TK minimal du HSV sur pSwitch peuvent se lier à la protéine régulatrice pSwitch
• Ainsi, l’ajout de mifépristone régule à l’augmentation la production de protéines régulatrices
• Des niveaux accrus de protéine régulatrice GeneSwitch entraînent l’induction du gène d’intérêt de pGene/V5-His à des niveaux pouvant s’approcher de ceux des promoteurs viraux
• Fournit le vecteur d’expression pGene/V5-His avec un promoteur GAL4-E1b synthétique minimal qui est transcriptionnellement silencieux jusqu’à son activation

• De plus, la GeneSwitch protéine surrégule sa propre expression, ce qui augmente l’expression du gène d’intérêt provenant de pGene/V5-His
• Étiquette épitope C-terminale V5 pour la détection avec des anticorps anti-V5
• Tag polyhistidine C-terminale (6xHis) pour une purification rapide avec de la résine chélante de nickel et la détection avec des anticorps anti-His(C-terme)
• Zeocin gène de résistance pour une sélection efficace tant chez les cellules de mammifères que chez E. coli

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