Invitrogen™ ElectroMAX™ Stbl4™ Cellules compétentes

ElectroMAX Stbl4 Les Cellules Compétentes sont spécifiquement conçues pour cloner des inserts instables. Cette souche est dérivée de Stbl2 cellules (conçue à partir de la souche JM109/J5). Pour améliorer les performances, la  mutationgal- a été introduite, lon- a été rétablie en allèle de type sauvage lon+, et l’épisome F′ a été introduit. La Stbl4 souche conserve les propriétés génétiques de la Stbl2 souche pour le maintien des inserts instables tels que les séquences rétrovirales, les répétitions directes et les gènes à réseau tandem. De plus, la Stbl4 souche serait utilisée dans la découverte de métabolites secondaires complexes ainsi que dans la construction et l’entretien de la bibliothèque CRISPR.

En tant que cellules électrocompétentes, Stbl4 les cellules peuvent atteindre une grande efficacité de transformation de >5 x 10⁹ cfu/μg, ce qui les rend idéales pour des applications complexes telles que la génération de cDNA, CRISPR et des bibliothèques génomiques d’inserts instables ou l’utilisation d’un faible apport d’ADN. Les cellules électrocompétentes Stbl4 sont capables d’absorber et de maintenir de grands plasmides (par exemple, des cosmides de 50 kb et 100 –clones P1 de 200 kb). Stbl4 les cellules contiennent aussi un épisome F', ce qui leur permet de servir d'hôte pour l'ADN simple brin comme les vecteurs de clonage M13mp si une pelouse de QI DH5αF′est fournie pour permettre la formation de plaques. Le marqueur lacZΔM15 fournit αla complémentation du βgène -galactosidase provenant de pUC ou de vecteurs similaires et peut donc être utilisé pour le criblage bleu-blanc des colonies sur des plaques d’agar contenant X-gal ou Bluo-gal et IPTG. La mutation mcrA et ladélétion mcr BC-hsd RMS-mrr permettent le clonage de séquences génomiques qui sont méthylées. Enfin, la mutation finaleA1 augmente grandement le rendement et la qualité des plasmides.

ElectroMAX Stbl4 Caractéristiques
• cellulaires compétentes Fournir des efficacités de transformation de >5 x 10⁹ cfu/μg
• Génotype unique stabilise les répétitions directes et les séquences•
rétrovirales La mutation mcr A et ladélétion MCR BC-hsd RMS-mrr permettent le clonage de séquences génomiques méthylées Soutien
• du criblage bleu-blanc des clones recombinants grâce à lacZΔM15
• Conçu pour fournir des préparations plasmidiques à haut rendement pour des applications
• en aval, l'épisome F' stable permet l'isolement de l'ADN

ss. Propagation d'ADN instable et volumineux avec des cellules
à haute efficacité de transformation. De nombreuses souches cellulaires compétentes possèdent le génotype recA1, ce qui réduit la recombinaison. Cependant, il y a des cas où l’ADN que vous essayez de cloner est encore instable dans ces cellules, peut-être à cause de la présence de répétitions inversées ou directes ou de tractus riches en GC. Bien que de telles séquences soient relativement courantes dans les génomes eucaryotes, elles sont rares chez E. coli. Par conséquent, des réarrangements peuvent survenir lorsque ces séquences sont introduites dans les souches standard d’E. coli.

Génotype : mcrA Δ(mcr BC-hsdRMS-mrr) recommandationA1 extrémitéA1 gyrA96 gal– thi-1 supE44 λ–relA1 Δ(lac-proAB) / F′ [proAB+lacIqZΔM15 Tn10(TetR)]

Trouvez la souche et le format qui correspondent à vos besoins
• Les souches Stbl sont disponibles avec une variété de gènes Contexte.
•  La Stbl3 déformation est disponible en MultiShot format pour des applications à haut débit.
•  MAX Efficiency DH5αF´QI Cellules compétentes (Cat. No 18288019) sont disponibles en format chimiquement compétent.

Notes
• Pour maximiser la stabilisation des répétitions directes et des séquences rétrovirales, incubez Stbl4 les cellules et effectuez des études d’expression à 30 °C.
• Un appareil d’électroporation à haute tension est nécessaire.
• Stbl4 les séquences du génome de souche sont disponibles dans la base de données du NCBI GenBank sous les numéros d’accès CP076043.1 et CP076044.1 (Assad et al. 2021).