Thermo Scientific™ BstXI (10 U/μL)

5'... C C A N N N N N▵N T G G... 3'

3'... G G T N▵N N N N N A C C... 5'

Conditions pour une activité à 100% :

• tampon b1X O : 50 mM Tris-HCl (pH 7,5 à 37 °C), 10 mM_{MgCl 2}, 100 mM NaCl et 0,1 mg/mL de BSA
• Incubez à 55 °C

Tampon de stockage :

• Le BstXI est fourni en : 10 mM de Tris-HCl (pH 7,5 à 25 °C), 50 mM de KCl, 1 mM de DTT, 0,1 mM d’EDTA, 0,2 mg/mL de BSA et 50% (v/v) de glycérol

Ligature et reclivage :

• Après une surdigestion multipliée par BstXI, environ 95% des fragments d’ADN peuvent être ligés et redécoupés

Effets de la méthylation :

• Dam : ne se chevauche — jamais, aucun effet
• Dcm : peut se chevaucher — un clivage altéré
• CpG : jamais de — chevauchement sans effet
• EcoKI : jamais de chevauchement — sans effet
• EcoBI : jamais de chevauchement — sans effet

Digestion de l’ADN incorporé dans l’agarose :

• Un minimum de 5 unités de cette enzyme est nécessaire pour la digestion complète de 1 μg d’ADN lambda incrusté dans l’agarose en 16 heures

   

Remarque :

L’incubation à 37 °C entraîne une activité de 50%. Une surdigestion supérieure à 15 fois avec BstXI peut entraîner une activité stellaire. Le clivage BstXI est altéré par la méthylationdu dcm chevauchée. Pour éviter la méthylationDCM , utilisez une souchede type dam-, dcm comme GM2163 (#M0099).