Invitrogen™ CyQUANT™ Essais de viabilité des cellules MTT et XTT

Mesurer la viabilité cellulaire est essentiel pour évaluer la santé cellulaire, déterminer la génotoxicité et évaluer les médicaments anticancéreux. Les indicateurs colorimétriques tels que MTT et XTT offrent des méthodes rapides, économiques et cohérentes pour déterminer quantitativement la viabilité des cellules mammifères à l’aide de lecteurs de microplaques. Le CyQUANT test MTT est un test de viabilité cellulaire bien établi et populaire, tandis que le CyQUANT test XTT offre une plage dynamique élevée et une faible variabilité. En plus d’une performance améliorée, le CyQUANT test XTT offre une mesure continue sans avoir besoin de lyse ou de solubilisation cellulaire.

Caractéristiques du CyQUANT test de viabilité des cellules MTT

• Le kit—complet et optimisé de test MTT comprend tous les réactifs nécessaires à la détection colorimétrique des cellules de mammifères viables
• Le réactif—MTT de confiance utilise le réactif MTT bien établi pour mesurer le potentiel redox cellulaire
• Configuré pour effectuer 1 000 tests à l’aide d’une microplaque à 96 puits

Principe du CyQUANT test de viabilité des cellules MTT

Le CyQUANT test MTT repose sur la réduction du sel tétrazolium jaune soluble dans l’eau MTT (bromure de 3-(4,5-diméthylthiazol-2-yl)-2,5-diphényltétrazolium) en cristaux de formazan violet insolubles par des cellules métaboliquement actives. Le potentiel redox dans les mitochondries des cellules mammaliennes actives réduit le MTT à un produit formazan fortement pigmenté. Après la solubilisation, l’absorption du formazan peut être mesurée sur un lecteur de microplaques, ce qui correspond au nombre de cellules métaboliquement actives.

Protocole pour le CyQUANT test de viabilité des cellules MTT

Préparez le réactif MTT et incubez les cellules pendant une période précise, durant laquelle les cellules viables transforment le MTT en produit formazan violet insoluble. Les cristaux de formazan sont ensuite solubilisés avec le réactif SDS (sulfate de dodécyle de sodium) inclus ou DMSO, et l’absorbance est mesurée à l’aide d’un lecteur de microplaques à 570 nm.

Caractéristiques du CyQUANT test de viabilité des cellules XTT

• Essai de viabilité basé sur une haute absorbance de reproductibilité—qui mesure le potentiel redox dans les cellules vivantes à faible variabilité
• Une plage dynamique et une sensibilité—améliorées ont amélioré la performance comparée à d’autres tests de viabilité colorimétrique
• Format—facile de mixage et de lecture, configuré pour une plaque de 96 puits à la fois
• Non toxique et continu—permet de collecter plusieurs points temporels sans lyse cellulaire
• C’est rapide et simple—, sans étape de solubilisation, ce qui rend l’exécution plus rapide et facile à réaliser que le test MTT
• Le kit—complet de test XTT comprend tous les matériaux nécessaires pour dix plaques de 96 puits

Principe du CyQUANT test de viabilité des cellules XTT

Le CyQUANT test XTT repose sur la réduction du sel tétrazolium jaune soluble dans l’eau XTT (2,3-bis-(2-méthoxy-4-nitro-5-sulfopényl)-2H-tétrazolium-5-carboxanilide) en un produit formazan orange soluble dans l’eau par des cellules métaboliquement actives. Contrairement au MTT, le XTT ne forme pas de cristaux insolubles et produit un produit formazan soluble qui ne nécessite pas de solubilisation. Puisqu’aucune lyse ou solubilisation cellulaire n’est requise pour la détection, le test XTT peut être utilisé comme test continu, et plusieurs points temporels peuvent être analysés à l’aide d’un lecteur de microplaques à base d’absorbance.

En plus du réactif XTT, le CyQUANT kit de test de viabilité des cellules XTT inclut un réactif de couplage électronique pour améliorer la plage dynamique du test. La sensibilité et la consistance du test augmentent considérablement lorsque le réactif de couplage électronique est utilisé avec le CyQUANT kit de test XTT.

Protocole pour le CyQUANT test de viabilité des cellules XTT

Pour chaque plaque de 96 puits, une bouteille de réactif XTT et un tube de réactif de couplage électronique sont décongelés et mélangés pour créer une solution stock, puis ajoutés aux cellules. Les cellules sont incubées pendant 2 –à 4 heures, et les cellules métaboliquement actives réduisent le XTT pour former un colorant formazan orange soluble dans l’eau. L’absorption du colorant est ensuite mesurée à l’aide d’un lecteur de microplaques à 450 nm et 650 nm.

La solution de réactif XTT/réactif de couplage électronique doit être utilisée rapidement après le mélange, car le stockage prolongé à température ambiante ou les cycles de congélation/dégel réduisent la performance et la sensibilité du dossage. Pour assurer une performance et une reproductibilité optimales, le kit d’essai CyQUANT XTT comprend des réactifs séparés XTT et de couplage électronique qui sont mélangés juste avant utilisation.