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Molecular Probes™ Click-iT™ Kit de cytométrie en flux EdU Pacific Blue™
Description
Le Click-iT™ kit de cytométrie en flux EdU Pacific Blue™ offre un test simplifié et plus robuste pour analyser la réplication de l’ADN dans les cellules proliférantes comparativement aux méthodes traditionnelles BrdU. L’ADN nouvellement synthétisé est analysé à l’aide du laser à 405 nm du cytomètre en flux.
Résultats précis—supérieurs comparés aux tests BrdU
Rapide—ne dure que 90 minutes
Plus d’essais économiques—par kit
Consultez le guide de sélection pour tous Click-iT™ les tests EdU et Click-iT™ Plus EdU pour la cytométrie en flux.
Une méthode avancée pour obtenir des résultats supérieurs à BrdU
La méthode la plus précise d’analyse de la prolifération est la mesure directe de la synthèse de l’ADN. À l’origine, cela se faisait par l’incorporation de nucléosides radioactifs, c’est-à-dire la 3H-thymidine. Cette méthode a été remplacée par la détection par anticorps de l’analogue nucléoside bromodéeoxyuridine (BrdU). Les Click-iT™ kits de cytométrie en flux EdU sont des alternatives novatrices au test BrdU. EdU (5-ethynyl-2-désoxyuridine´) est un analogue de la thymidine qui est incorporé à l’ADN lors de la synthèse active de l’ADN. La détection repose sur la chimie du clic : un cuivre a catalysé une réaction covalente entre une azide et un alkyne. Dans cette application, l’alkyne se trouve dans la moitié ethynyl de l’EdU, tandis que l’azide est couplée à Alexa Fluor™ 488, Alexa Fluor™ 647, ou Pacific Blue™ colorants. Les méthodes standard de cytométrie en flux sont utilisées pour déterminer le pourcentage de cellules de phase S dans la population (Fig. 1).
Les conditions légères permettent l’utilisation avec des colorants et
anticorps du cycle cellulaireLes avantages de l’étiquetage Click-iT™ EdU sont clairement visibles lors de la réalisation du test (Fig. 2). La petite taille de l’azide de colorant permet une détection efficace de l’EdU incorporée dans des conditions légères, tandis que la fixation standard à base d’aldéhyde et la perméabilisation au détergent suffisent pour que le Click-iT™ réactif de détection puisse accéder à l’ADN. Cela contraste avec les tests BrdU qui nécessitent une dénaturation de l’ADN (utilisant HCl, chaleur ou digestion avec DNase) pour exposer le BrdU afin qu’il puisse être détecté avec un anticorps anti-BrdU. Le traitement de l’échantillon pour le test BrdU peut entraîner une altération du signal de la distribution du cycle cellulaire ainsi qu’une destruction des sites de reconnaissance antigénique lors de l’utilisation de la méthode HCl. En revanche, le kit de prolifération cellulaire EdU, facile à utiliser, est compatible avec les colorants du cycle cellulaire. Ce kit de test EdU peut aussi être multiplexé avec des anticorps contre les marqueurs de surface et intracellulaires.
Protocole rapide et simple
Le Click-iT™ protocole EdU est basé sur les étapes de fixation de l’aldéhyde et de perméabilisation du détergent pour le marquage immunohistochimique des anticorps, mais EdU est compatible avec d’autres agents de fixation/perméabilisation, notamment la saponine et le méthanol. En seulement cinq étapes, vous’serez prêt à analyser vos données de prolifération cellulaire :
Traiter les cellules avec EdUM
Fixer et perméabiliser les cellules
Détectez les cellules de la phase S avec Click-iT™ un cocktail de détection pendant 30 minutes
Laver une fois
Analysez
pour obtenir des résultats précis de façon économique
En augmentant le nombre de tests par kit, le Click-IT™ kit de cytométrie en flux EdU Pacific Blue™ est moins coûteux que les tests BrdU traditionnels, ce qui les rend idéaux pour les grandes expériences.
Pour la recherche seulement. Ne pas utiliser dans des procédures de diagnostic.
Consultez le guide de sélection pour tous Click-iT™ les tests EdU et Click-iT™ Plus EdU pour la cytométrie en flux.
Une méthode avancée pour obtenir des résultats supérieurs à BrdU
La méthode la plus précise d’analyse de la prolifération est la mesure directe de la synthèse de l’ADN. À l’origine, cela se faisait par l’incorporation de nucléosides radioactifs, c’est-à-dire la 3H-thymidine. Cette méthode a été remplacée par la détection par anticorps de l’analogue nucléoside bromodéeoxyuridine (BrdU). Les Click-iT™ kits de cytométrie en flux EdU sont des alternatives novatrices au test BrdU. EdU (5-ethynyl-2-désoxyuridine´) est un analogue de la thymidine qui est incorporé à l’ADN lors de la synthèse active de l’ADN. La détection repose sur la chimie du clic : un cuivre a catalysé une réaction covalente entre une azide et un alkyne. Dans cette application, l’alkyne se trouve dans la moitié ethynyl de l’EdU, tandis que l’azide est couplée à Alexa Fluor™ 488, Alexa Fluor™ 647, ou Pacific Blue™ colorants. Les méthodes standard de cytométrie en flux sont utilisées pour déterminer le pourcentage de cellules de phase S dans la population (Fig. 1).
Les conditions légères permettent l’utilisation avec des colorants et
anticorps du cycle cellulaireLes avantages de l’étiquetage Click-iT™ EdU sont clairement visibles lors de la réalisation du test (Fig. 2). La petite taille de l’azide de colorant permet une détection efficace de l’EdU incorporée dans des conditions légères, tandis que la fixation standard à base d’aldéhyde et la perméabilisation au détergent suffisent pour que le Click-iT™ réactif de détection puisse accéder à l’ADN. Cela contraste avec les tests BrdU qui nécessitent une dénaturation de l’ADN (utilisant HCl, chaleur ou digestion avec DNase) pour exposer le BrdU afin qu’il puisse être détecté avec un anticorps anti-BrdU. Le traitement de l’échantillon pour le test BrdU peut entraîner une altération du signal de la distribution du cycle cellulaire ainsi qu’une destruction des sites de reconnaissance antigénique lors de l’utilisation de la méthode HCl. En revanche, le kit de prolifération cellulaire EdU, facile à utiliser, est compatible avec les colorants du cycle cellulaire. Ce kit de test EdU peut aussi être multiplexé avec des anticorps contre les marqueurs de surface et intracellulaires.
Protocole rapide et simple
Le Click-iT™ protocole EdU est basé sur les étapes de fixation de l’aldéhyde et de perméabilisation du détergent pour le marquage immunohistochimique des anticorps, mais EdU est compatible avec d’autres agents de fixation/perméabilisation, notamment la saponine et le méthanol. En seulement cinq étapes, vous’serez prêt à analyser vos données de prolifération cellulaire :
pour obtenir des résultats précis de façon économique
En augmentant le nombre de tests par kit, le Click-IT™ kit de cytométrie en flux EdU Pacific Blue™ est moins coûteux que les tests BrdU traditionnels, ce qui les rend idéaux pour les grandes expériences.
Pour la recherche seulement. Ne pas utiliser dans des procédures de diagnostic.
Spécifications
Spécifications
| Content And Storage | Contient de l'EdU (5-ethynyl-2' -désoxyuridine), Pacific Blue™ de l'azide, du diméthylsulfoxyde anhydre (DMSO), Click-iT™ un fixateur, Click-iT™ un tampon de perméabilisation et de lavage à base de saponine, du sulfate de cuivre (II) et Click-iT™ un additif tampon EdU. |
| Detection Method | Fluorescence |
| For Use With (Equipment) | Cytomètres en flux |
| Product Type | Kit de cytométrie en flux |
| Dye Type | Pacific Blue™ |
| Format | Tube(s) |
| Product Line | Click-iT, Pacific Blue |
| Quantity | 50 tests |
| Shipping Condition | Température ambiante |
| Emission Wavelength Range | 404/450 |
Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser dans des procédures de diagnostic.