Invitrogen™ BODIPY™ 650/665-X Ester NHS (Ester succinimidyl)

BODIPY™ Le colorant 650/665-X est un colorant fluorescent d’un rouge lointain, brillant, avec une excitation et une émission similaires à celles Cy5 de l’or Alexa Fluor™ 647. Elle a un coefficient d’extinction élevé et un rendement quantique de fluorescence élevés, et est relativement insensible à la polarité du solvant et aux variations de pH. Contrairement aux fluorophores Alexa Fluor™ très solubles dans l’eau 488 et fluorescéine (FITC), BODIPY™ les colorants possèdent des propriétés hydrophobes uniques, idéales pour colorer les lipides, les membranes et d’autres composés lipophiles. BODIPY™ Le colorant 650/665-X a une durée de vie à l’état excité relativement longue (typiquement 5 nanosecondes ou plus), ce qui est utile pour les tests basés sur la polarisation de fluorescence et une grande section efficace de deux photons pour l’excitation multiphoton. En plus des formulations de colorants réactifs, nous offrons BODIPY™ un colorant 650/665-X conjugué à une variété d’anticorps, peptides, protéines, traceurs et substrats d’amplification optimisés pour le marquage et la détection cellulaires.

L’ester NHS (ou ester succinimidyle) de BODIPY™ 650/665-X est l’outil le plus populaire pour conjuguer le colorant à une protéine ou à un anticorps. Les esters NHS peuvent être utilisés pour marquer les amines primaires (R-NH₂) des protéines, des oligonucléotides modifiés par l’amine et d’autres molécules contenant de l’amine. Les conjugués 650/665-X résultants BODIPY™ présentent une fluorescence brillante, des largeurs d’émission étroites et des durées de vie à l’état excité relativement longues, ce qui peut être utile pour les tests de polarisation de fluorescence et la microscopie à excitation à deux photons (TPE).

Ce colorant réactif contient un espaceur aminohexanoyl (« X ») de sept atomes entre le fluorophore et le groupe ester NHS. Cet espaceur aide à séparer le fluorophore de son point d’attache, réduisant potentiellement l’interaction du fluorophore avec la biomolécule à laquelle il est conjugué.

Informations détaillées sur cet BODIPY™ ester 650/665-X du NHS :

Étiquetage fluorophore : BODIPY™ Groupe réactif 650/665-X
: Réactivité ester du NHS (ester succinimidyle)
: Les amines primaires sur les protéines et les ligands, les oligonucléotides
modifiés par l’amine Ex/Em du conjugué : 646/660 nm Coefficient d’extinction : 102 000 cm-1M-1
Poids moléculaire : 643,45

Réaction
de conjugaison typique Les réactifs à l’amine peuvent être conjugués avec pratiquement n’importe quelle protéine ou peptide; le protocole fourni est optimisé pour les anticorps IgG.
La réaction peut être adaptée à n’importe quelle quantité de protéine, mais la concentration de cette protéine devrait être d’au moins 2 mg/mL pour des résultats optimaux. Nous recommandons d’essayer trois degrés différents d’étiquetage, en utilisant trois rapports molaires différents du réactif par rapport à la protéine.

L’ester BODIPY™ NHS est généralement dissous dans du diméthylformamide anhydre (DMF) ou du diméthylsulfoxyde (DMSO) de haute qualité, et la réaction est effectuée dans un tampon de bicarbonate de sodium 0,1-0,2 M, pH 8,3, à température ambiante pendant 1 heure. Parce que le pKa de l’amine terminale est plus bas que celui du groupe lysine epsilon-amino, vous pouvez obtenir un marquage plus sélectif de la terminale de l’amine en utilisant un tampon plus proche du pH neutre.

Purification
conjuguée Les anticorps marqués sont généralement séparés du colorant libre BODIPY™ à l’aide d’une colonne de filtration en gel, comme Sephadex™ G-25, BioGel™ P-30 ou équivalent. Pour des protéines beaucoup plus grandes ou plus petites, choisissez un milieu de filtration sur gel avec une coupure de poids moléculaire appropriée ou purifiez par dialyse. Nous offrons plusieurs kits de purification optimisés pour différentes quantités de conjugué d’anticorps :
kit de purification conjugué par anticorps pour 0,5-1 mg (A33086) kit
de purification conjugué par anticorps pour 20-50 μg (A33087) kit
de purification conjugué par anticorps pour 50-100 μg (A33088)

En savoir plus sur le marquage
des protéines et des anticorps Nous offrons un large choix de kits d’étiquetage Molecular Probes™ d’anticorps et protéiques adaptés à votre matériau de départ et à votre installation expérimentale. Consultez nos kits de marquage des anticorps ou utilisez notre outil de sélection de la chimie du marquage pour d’autres choix. Pour en savoir plus sur nos kits d’étiquetage, lisez la section 1.2 des kits pour le marquage des protéines et des acides—nucléiques dans le Molecular Probes™ Manuel.

Nous’fabriquerons un conjugué personnalisé pour vous
. Si vous ne trouvez’pas ce que vous’cherchez dans notre catalogue en ligne, nous’préparerons un anticorps ou un conjugué protéique personnalisé pour vous. Notre service de conjugaison personnalisée est efficace et confidentiel, et nous assumons la qualité de notre travail. Nous sommes ISO certifiés 13485:2000.