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Invitrogen™ FirstChoice™ Équipement RLM-RACE
Description
Comprend
Exo– Klenow, 10X Decamer Solution, 5X Reaction Buffer minus dATP, 5X Reaction Buffer minus dCTP, DECAtemplate GAPDH-M, and 0.5M EDTA should be stored at –20°C. Nuclease-free water may be stored at any temperature.
Exige
SuperTaq ADN polymérase thermostable Taq vendue séparément. Pour une amplification optimale des fragments ≥à 1 ko, utilisez SuperTaq-Plus.
FastAP™ Phosphatase alcaline thermosensible, tampon 10X FastAP , pyrophosphatase d'acide de tabac, tampon TAP 10X, T4 ligase ARN, tampon ligase ARN 10X T4 , M-MLV inverse Transcriptase, inhibiteur RNase, tampon RT 10X, mélange dNTP 2,5 mM, ARN thymus de souris (1 mg/ml), décameurs aléatoires, adaptateur RACE 5', adaptateur RACE 3', amorce externe RACE 5', amorce interne RACE 5', amorce externe RACE 3' , amorce externe RACE 3' , L'amorce interne RACE de 3', l'amorce de contrôle extérieur RACE de 5', l'amorce de contrôle interne RACE de 5', la amorce de contrôle PCR de 5', l'amorce de contrôle RACE de 3' et la solution d'arrêt à l'acétate d'ammonium doivent être stockés à -20 °C. L’eau sans nucléase peut être stockée à n’importe quelle température.
Le FirstChoice™ kit RLM-RACE est conçu pour amplifier l’ADNc, à partir d’ARNm entièrement longueur, capuchonné, jusqu’à l’amplification rapide médiatisée par ligase ARN des extrémités de l’ADNc (RLM-RACE). Le kit assure l’amplification uniquement des transcrits de pleine longueur en éliminant l’ARN ribosomal, l’ARNm fragmenté, l’ARNt et l’ADN génomique contaminant lors du processus d’amplification. Ce kit représente une amélioration majeure par rapport au protocole RACE (amplification rapide des extrémités d’ADNc) de base.
Note : la phosphatase intestinale de veau (CIP) a été remplacée par FastAP le protocole ajusté de phosphatase alcaline thermosensible qui élimine le besoin d’extraction de phénol/chloroforme et de précipitation d’éthanol. Si choisi, la phase phénol/chloroforme peut être utilisée avec un kit mis à jour après vérification des volumes de réaction.
Les caractéristiques du FirstChoice kit RLM-RACE incluent :
- Sélectionne les extrémités de 5' et/ou 3' d'ARNm entièrement longueur, avec une capsule
- Optimisé pour assurer la détection même de l’ARNm rare, produisant un produit spécifique
- Permet de terminer l’expérience en moins d’une journée
Sélectionne un—ARNm de longueur complète sans ARNr, ARNt ou ARNm dégradé
Dans la FirstChoice procédure RLM-RACE, les ARNm de longueur complète sont sélectionnés en traitant l'ARN total ou ARN poly(A) avec FastAP de la phosphatase alcaline thermosensible afin d'éliminer le phosphate 5'-de toutes les molécules contenant des phosphates libres de 5'(ARN ribosomal, ARNm fragmenté, ARNt et ADN génomique contaminant). Les ARNm de longueur complète ne sont pas affectés. L'ARN est ensuite traité avec de la pyrophosphatase de l'acide de tabac (TAP) pour retirer la structure du capuchon de l'ARNm sur toute la longueur, laissant ainsi un monophosphate de 5'. Un adaptateur d'ARN synthétique est ligaturé à la population—d'ARN; seulement les molécules contenant un phosphate 5', les ARNm non capuchés et de longueur complète, accepteront l'adaptateur. Des réactions à base aléatoire, de transcription inverse et une PCR imbriquée sont ensuite effectuées pour amplifier l'extrémité 5' de votre transcription spécifique.
De l’ARN à la PCR en moins d’une journée
Chaque étape de la FirstChoice procédure RLM-RACE a été optimisée, ce qui vous permet de compléter toutes les réactions enzymatiques et même de commencer la PCR en moins de 5 heures. Le FirstChoice kit RLM-RACE contient des réactifs et des enzymes permettant de produire 6 préparations d’ADNc prêtes pour RLM-RACE, des amorces et des amorces adaptatrices RACE imbriquées pour 100 réactions PCR. Le kit comprend des réactifs à transcription inverse ainsi qu'un adaptateur RACE 3' et des amorces pour RACE 3'. Chaque kit contient de l'ARN de contrôle et des amorces pour tester la performance du kit, protocole décrit dans le Guide d'utilisation utilisant Platinum™ le mélange master PCR à démarrage à chaud II.
Order Info
Conditions d’expédition : Glace sèche
Spécifications
Spécifications
| Type de produit | Équipement RLM-RACE |
| Comprend | Kit avec manuel, FastAP™ phosphatase alcaline thermosensible, tampon 10X FastAP , pyrophosphatase d’acide de tabac, tampon TAP 10X, T4 ligase ARN, tampon 10X T4 de ligase ARN, M-MLV inverse Transcriptase, inhibiteur RNase, tampon RT 10X, mélange dNTP 2,5 mM, ARN thymus de souris (1 mg/ml), décameurs aléatoires, adaptateur RACE 5', adaptateur RACE 3', amorce externe RACE 5', amorce interne RACE 5', amorce externe RACE 5' , amorce externe RACE 3' , amorce externe RACE 3' Amorce interne 3' RACE, amorce de contrôle extérieur RACE 5', amorce de contrôle interne RACE 5', amorce PCR 5', amorce RACE Control 3' et solution d’arrêt à l’acétate d’ammonium, eau sans nucléase |
| Contenu et stockage | •Tampon FastAP Phosphatase alcaline thermosensible 10X FastAP, Pyrophosphatase• |
| Type de produit final | ADNc. |
| Température de réaction optimale | 42 °C |
| Transcriptase inverse | M-MLV |
| Format | Équipement |
| Gamme de produit | Ambion, FirstChoice |
| À utiliser avec (application) | Construction des bibliothèques & d’ADN |
| Quantité | 1 Kit avec manuel |
Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser dans des procédures de diagnostic.