Invitrogen™ Alexa Fluor™ 532 Ester NHS (Ester succinimidylique)

Alexa Fluor™ Le 532 est un colorant jaune vif avec excitation, idéalement adapté à la gamme laser Nd :YAG doublée en fréquence. Utilisé pour la génération stable de signaux en imagerie et cytométrie en écoulement, Alexa Fluor™ le colorant 532 est soluble dans l’eau et insensible au pH du pH 4 au pH 10. En plus des formulations de colorants réactifs, nous offrons Alexa Fluor™ 532 colorants conjugués à une variété d’anticorps, peptides, protéines, traceurs et substrats d’amplification optimisés pour le marquage et la détection cellulaires.

L’ester NHS (ou ester succinimidyle) de Alexa Fluor™ 532 est l’outil le plus populaire pour conjuguer ce colorant en protéine ou anticorps. Les esters du NHS peuvent être utilisés pour marquer les amines primaires (R-NH₂) des protéines, des oligonucléotides modifiés par l’amine et d’autres molécules contenant de l’amine. Le conjugué résultant Alexa Fluor™ présentera une fluorescence plus brillante et une plus grande photostabilité que les conjugués d’autres fluorophores spectrails similaires.

Informations détaillées sur cet AlexaFluor™ ester du NHS :

• Étiquette fluorophore : Alexa Fluor™ colorant 532
• Groupe réactif : ester du NHS
• Réactivité : amines primaires sur les protéines et ligands, oligonucléotides modifiés par l’amine
• Ex/Em du conjugué : 530/555 nm
• Coefficient d’extinction : 81 000 ^cm-1M-1
• Poids moléculaire : 723,8

Réaction typique de conjugaison

Vous pouvez conjuguer des réactifs réactifs à l’amine avec pratiquement n’importe quelle protéine ou peptide (le protocole fourni est optimisé pour les anticorps IgG). Vous pouvez adapter la réaction à n’importe quelle quantité de protéines, mais la concentration devrait être d’au moins 2 mg/mL pour des résultats optimaux. Nous recommandons d’essayer trois degrés différents d’étiquetage, en utilisant trois rapports molaires différents du réactif par rapport à la protéine.

L’ester Alexa Fluor™ NHS est généralement dissous dans du diméthylformamide anhydre (DMF) ou du diméthylsulfoxyde (DMSO) (D12345) de haute qualité, et la réaction est effectuée dans un tampon de bicarbonate de sodium 0,1 –0,2 M, pH 8,3, à température ambiante pendant 1 heure. Parce que le pKa de l’amine terminale est plus bas que celui du groupe lysine epsilon-amino, vous pouvez obtenir un marquage plus sélectif de la terminale de l’amine en utilisant un tampon plus proche du pH neutre.

Purification conjuguée

Les anticorps marqués sont généralement séparés du colorant libre Alexa Fluor™ à l’aide d’une colonne de filtration en gel, comme Sephadex™ le G-25, BioGel™ le P-30 ou équivalent. Pour des protéines beaucoup plus grandes ou plus petites, choisissez un milieu de filtration en gel avec une limite de poids moléculaire appropriée ou purifiez par dialyse. Nous offrons plusieurs kits de purification optimisés pour différentes quantités de conjugué d’anticorps :

• Trousse de purification conjuguée par anticorps pour 0,5-1 mg (Cat. Non. A33086)
• Trousse de purification conjuguée par anticorps pour 20 à 50 μg (A33087)
• Kit de purification conjuguée par anticorps pour 50-100 μg (A33088)

En savoir plus sur le marquage des protéines et des anticorps

Nous offrons un large choix de kits d’étiquetage Molecular Probes™ d’anticorps et de protéines adaptés à votre matériau de départ et à votre installation expérimentale. Consultez nos kits de marquage des anticorps ou utilisez notre outil de sélection de la chimie du marquage pour d’autres choix. Pour en savoir plus sur nos kits d’étiquetage, lisez la section 1.2 des kits pour le marquage des protéines et des acides—nucléiques dans le Molecular Probes™ Manuel.

Nous allons vous faire un conjugué sur mesure

Si vous ne trouvez pas ce que vous cherchez dans notre catalogue en ligne, nous préparerons un anticorps ou un conjugué protéique personnalisé pour vous. Notre service de conjugaison personnalisée est efficace et confidentiel, et nous assumons la qualité de notre travail. Nous sommes ISO certifiés 13485:2000.