Molecular Probes™ Alexa Fluor™ Ester TFP 488

Alexa Fluor™ Les colorants sont des molécules réactives qui peuvent être utilisées pour ajouter un marquant fluorescent aux amines primaires (R-NH₂) des protéines, des oligonucléotides modifiés à l’amine et d’autres molécules contenant de l’amine. Les conjugués résultants Alexa Fluor™ présentent une fluorescence plus brillante et une plus grande photostabilité que les conjugués d’autres fluorophores spectrails similaires. Alexa Fluor™ L’ester de 488 TFP produit un conjugué avec excitation/émission de 495/515 nm qui est spectralement similaire à la fluorescéine (FITC) et Cy2 aux conjugués.

Alexa Fluor™ Les colorants sont disponibles avec des émissions de fluorescence couvrant tout le spectre visible et proche infrarouge (voir la note 1.1 de la Alexa Fluor™ série—de colorants dans le Molecular Probes™ Manuel) et offrent la combinaison unique de solubilité à l’eau et d’insensibilité au pH entre le pH 4 et 10 pour une compatibilité dans divers environnements biologiques.

Les esters de TFP (tétrafluorophényl) sont une amélioration par rapport à la chimie des esters succinimidyles (SE ou NHS-ester) généralement utilisée pour fixer les fluorophores ou haptenes aux amines primaires des biomolécules. Les deux chimies réactives produisent la même liaison amide forte entre le colorant ou hapten et le composé d’intérêt, mais les esters TFP sont moins sensibles à l’hydrolyse spontanée lors des réactions de conjugaison. Alexa Fluor™ Les esters de la TFP restent stables pendant plusieurs heures au pH de base, généralement utilisé pour des réactions –qui durent bien plus longtemps que les esters de succinimidyle.

Réaction
typique de conjugaisonVous pouvez conjuguer des réactifs réactifs à l’amine avec pratiquement n’importe quelle protéine ou peptide; le protocole fourni est optimisé pour les anticorps IgG. Vous pouvez adapter la réaction à n’importe quelle quantité de protéines, mais la concentration de cette protéine devrait être d’au moins 2 mg/mL pour des résultats optimaux. Nous recommandons d’essayer trois degrés différents d’étiquetage, en utilisant trois rapports molaires différents du réactif par rapport à la protéine.

L’ester Alexa Fluor™ TFP est généralement dissous dans du diméthylsulfoxyde anhydre de haute qualité (DMSO) (D12345), et la réaction est effectuée dans un tampon de bicarbonate de sodium 0,1 –0,2 M, pH 8,3, à température ambiante pendant 1 heure. Parce que le pKa de l’amine terminale est plus bas que celui du groupe lysine epsilon-amino, vous pouvez obtenir un marquage plus sélectif de la terminale de l’amine en utilisant un tampon plus proche du pH neutre.

Purification
conjuguéeLes anticorps marqués sont généralement séparés du colorant libre Alexa Fluor™ à l’aide d’une colonne de filtration en gel, comme Sephadex™ le G-25, BioGel™ le P-30 ou équivalent. Pour des protéines beaucoup plus grandes ou plus petites, choisissez un milieu de filtration en gel avec une limite de poids moléculaire appropriée ou purifiez par dialyse.

En savoir plus sur le marquage
des protéines et des anticorpsNous offrons un large choix de kits d’étiquetage Molecular Probes™ d’anticorps et de protéines adaptés à votre matériau de départ et à votre installation expérimentale. Consultez le Marquage des anticorps de A à Z ou utilisez notre outil de sélection de la chimie du marquage pour d’autres choix. Pour en savoir plus sur nos kits d’étiquetage, lisez la section 1.2 des kits pour le marquage des protéines et des acides—nucléiques dans le Molecular Probes™ Manuel.

Nous allons’vous fabriquer un conjugué
personnaliséSi vous’ne trouvez pas ce que vous’cherchez dans notre catalogue en ligne, nous’vous préparerons un anticorps ou un conjugué protéique personnalisé. Notre service de conjugaison personnalisé est efficace et confidentiel, et nous sommes ISO certifiés 13485:2000.