Thermo Scientific™ Pierce™ Kit de Western Blot à S-nitrosylation et tampon HENS

La S-nitrosylation est une modification post-traductionnelle qui régule de nombreux processus, notamment la prolifération cellulaire, l’apoptose, la relaxation du muscle lisse, la libération de neurotransmetteurs et la différenciation. Lors de la S-nitrosylation, les radicaux d’oxyde nitrique réagissent avec les thiols de cystéine pour produire un adduct de S-NO qui modifie l’activité des protéines.

Pierce Kit de blot occidental S-nitrosylation

Le Pierce kit Western Blot de S-nitrosylation fournit les réactifs nécessaires pour effectuer une version modifiée du test traditionnel de commutation de S-nitrosylation, incluant un réactif bloqueant la cystéine, un agent réducteur, un tampon de réaction, un iodoTMT réactif de marquage et un anticorps anti-TMT. Le marquage est réalisé à l’aide d’un réactif non biologique iodoTMT au lieu de la HPDP-biotine, réduisant le signal de fond lors de la détection de western blot. En plus de la détection des protéines S-nitrosylées par western blot, une résine anti-TMT immobilisée peut être utilisée pour enrichir sélectivement des protéines/peptides S-nitrosylés marqués avec iodoTMT des réactifs. Ce flux de travail permet la cartographie des sites de S-nitrosylation et la quantification multiplexée à l’aide de la spectrométrie de masse.

Les caractéristiques du Pierce kit S-Nitrosylation Western Blot incluent :

• Des réactions de marquage optimisées spécifiques—échangent les modifications post-translationnelles de la S-nitrosocystéine par iodoTMT un réactif pour une détection facile par western blot à l’aide d’anticorps anti-TMT
• Un meilleur rapport signal sur bruit—utilise un réactif non biologique iodoTMT pour le marquage au lieu de la biotine HPDP, ce qui réduit le fond lors de la détection du western blot
• La méthode d’étiquetage compatible—avec le flux de travail est compatible avec d’autres méthodes d’analyse, incluant l’enrichissement via résine anti-TMT et la quantification multiplex par spectrométrie de masse
• Pratique—, tous les réactifs nécessaires incluaient un seul kit

Tampon HENS

Le tampon HENS comprend 100 mM de HEPES (pH 7,8), 1 mM d’EDTA, 0,1 mM de néocuproine et 1% de SDS. Il s’agit d’un tampon de lyse cellulaire destiné à être utilisé avec le Pierce kit Western Blot de S-nitrosylation, qui permet la détection sensible des modifications post-traductionnelles de la protéine S-nitrosocystéine dans un kit complet et facile à utiliser.