Invitrogen™ eBioscience™ Kit de coloration des cellules T régulatrices de souris #2

Contenu de l’équipement :

• FITC anti-souris CD4 (RM4-5) : 50 μg—d’utilisation à 0,125 μg/test
• PE anti-souris CD25 (PC61.5) : 50 μg—d’utilisation à 0,06 μg/test
• APC anti-souris/rats Foxp3 (FJK-16) : 25 μg—Utilisation à 0,5 μg/test
• APC de contrôle isotype Rat IgG2a K : 50 μg—Utilisation à 0,5 μg/test
• Anti-souris CD16/32 purifié : 50 μg—Utilisation à 2-5 μg/test
• Tampon de coloration par cytométrie en flux
• Concentré de fixation/perméabilisation : 30 mL
• Non inclus : Contrôles isotypes pour anti-CD4 (rat IgG2a, Cat. No 11-4321) et anti-CD25 (rat IgG1, Cat. No 12-4301)

L’anticorps FJK-16 réagit avec Foxp3 souris/rat, également connu sous les noms de FORKHEAD BOX P3, SCURFIN et JM2; La réactivité croisée de cet anticorps avec d’autres protéines n’a pas été déterminée. Foxp3, une protéine de 49 à 55 kDa, fait partie de la famille des régulateurs transcriptionnels à tête de fourche/hélice ailée, et a été identifié comme le gène défectueux chez les souris « scorfy » (sf). Une expression constitutive élevée de l’ARNm de Foxp3 a été démontrée dans les lymphocytes T régulateurs CD4+CD25+ (cellules Treg), et l’expression ectopique de Foxp3 dans les cellules CD4+CD25 confère un phénotype Treg dans ces cellules.

L’immunoblottage avec l’anticorps FJK-16s a cartographié l’épitope aux acides aminés 75-125 de la protéine Foxp3 de la souris. Chez l’humain, il a été démontré que cette région est alternativement sépisée au niveau de l’ARNm. Les isoformes alternativement épissées et non épissées sont présentes dans le sous-ensemble CD4+CD25+ des lymphocytes. Des expériences préliminaires de RT-PCR n’ont pas révélé cette isoforme alternative dans les splénocytes de souris, ce qui suggère une régulation génétique différente chez la souris et chez l’humain.

La coloration intracellulaire des splénocytes de souris avec FJK-16s à l’aide des ensembles et protocoles de coloration Foxp3 révèle environ 2% du total des splénocytes dans la souche C57Bl/6 et environ 3 à 5% dans la souche BALB/c de souris. L’analyse cytométrique à flux multicolore démontre qu’environ 90% des cellules CD4+CD25+ et 4% des cellules CD4+CD25- sont colorées avec les FJK-16. Les cellules B220+, CD11b+, CD11c+ et Ly6G/Gr-1+ ne montrent pas de cocoloration significative avec les FJK-16. Ces données sont cohérentes avec un rapport récent qui suit l’expression de Foxp3 à l’aide d’un knock-in de GFP (Fontenot et al., 2005).

FJK-16s réagit en croisement avec le Foxp3 du rat. Cela a été démontré par la coloration intracellulaire de Foxp3 et la cytométrie en flux des splénocytes de rat en utilisant la même méthode et les mêmes réactifs que pour les tissus de souris. Veuillez noter que les anticorps CD4 et CD25 inclus dans ce kit ne reconnaissent que les antigènes de souris. Pour colorer le tissu de rat, veuillez utiliser (CD4 FITC, Cat. No 11-0040 et CD25 PE, Cat. No 12-0390).