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Invitrogen™ MAGnify™ Système d’immunoprécipitation de la chromatine
Description
L’ADN isolé est prêt pour une analyse en aval par des méthodes telles que les tests basés sur la PCR ou la qPCR, ou le séquençage massif parallèle de l’ADN. L’immunoprécipitation par chromatine (ChIP) est une technique puissante pour étudier l’association de certaines protéines avec des régions spécifiques du génome. On croit que ces protéines de liaison à l’ADN spécifiques à la séquence jouent un rôle dans des processus cellulaires tels que la réplication, la recombinaison, la réparation et la ségrégation de l’ADN; stabilité chromosomique; progression du cycle cellulaire; et le silence épigénétique. Dans un test ChIP standard, une cellule est fixée par traitement à la formaldéhyde et la chromatine est cisaillée et immunoprécipitée via un anticorps très spécifique. Le chercheur analyse ensuite l’ADN pour identifier les régions génomiques où les protéines associées à la chromatine se lient à la chromatine in vivo. Lors de l’utilisation du MAGnify système, les cellules ou tissus sont traités avec du formaldéhyde pour générer des liaisons protéine-protéine et protéine-ADN entre des molécules proches du complexe de chromatine. Les cellules sont ensuite lysées, et la chromatine est libérée des noyaux puis cisaillée par sonication afin de réduire la taille moyenne des fragments d’ADN à 200 à 500 pb pour une analyse par PCR quantitative en temps réel (qPCR) ou de 100 à 300 pb pour une analyse par séquençage massif parallèle de l’ADN. Vous immunoprécipitez ensuite et isolez la protéine réticulée d’intérêt à l’aide d’un anticorps spécifique qualifié ChIP, conjugué à Dynabeads™ la protéine A/G. La réticulation au formaldéhyde est inversée par traitement thermique, et l’ADN associé à cette protéine est purifié. L’ADN est maintenant prêt pour des analyses en aval telles que la PCR en point terminal ou la PCR quantitative (qPCR), des analyses à l’échelle du génome utilisant des réseaux de pavage promoteurs, ou le séquençage de nouvelle génération. Dans l’analyse PCR/qPCR, les amorces sont conçues pour englober la séquence d’ADN désirée d’intérêt, et les données démontrent si la protéine spécifique d’intérêt est associée in vivo à cette région d’ADN.
- Sensible : obtenir des résultats avec des quantités d’échantillons inférieures à celles requises avec les flux de travail ChIP traditionnels
- Rapide : le protocole peut être complété en une seule journée, comparativement à 2 à 3 jours pour le test ChIP traditionnel
Spécifications
Spécifications
| Contenu et stockage | Module 1 (expédié sur glace humide, à conserver à 4 °C) : • 2,1 × ml Glycine (1,25 M) • 250 μl Dynabeads™ Protéine A/G (à ne pas congeler) • 1,4 ml Tampon • de réticulation inverse 500 μl Billes magnétiques de purification de l’ADN (à ne pas congeler) • 1,4 ml Tampon • de purification de l’ADN 200 μl Protéinase K (20 mg/ml) Module 2 (expédié sur glace humide, stocker à 4 °C) : • Tampon IP de 10 ml 1 • tampon IP de 7,5 ml 2 • tampon • de lavage ADN de 8 ml Module tampon d’élution de l’ADN 7,2 ml (expédié sur glace sèche, conserver à -20 °C) : • 100 μl d’inhibiteurs de protéase (200X) • 15 μl d’IgG de souris (1 μg/μl) • 15 μl d’IgG de lapin (1 μg/μl) Module (expédié sur glace sèche, stocké à -20 °C) : • 8 ml tampon • de dilution 3,6 ml tampon de lyse |
| Compatibilité à haut débit | Compatibilité à haut débit |
| Type d’échantillon | Cultures cellulaires, ADN (génomique), cellules vivantes |
| Gamme de produit | MAGnify |
| Quantité | Kit 24 réactions |
| À utiliser avec (application) | Immunoprécipitation par chromatine |
| Catégorie | Trousse d’immunoprécipitation/co-immunoprécipitation |
| Suffisant pour | 24 réactions |
Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser dans des procédures de diagnostic.