Invitrogen™ Image-iT™ Solutions fixatrices

Image-iT Les solutions fixatives sont des solutions fixatives prêtes à l’emploi, offertes sous divers formats pour répondre à divers besoins de recherche. Ils sont idéaux pour une utilisation avec des protéines fluorescentes, telles que la GFP et la RFP, ainsi que d’autres petits fluorophores colorants. Plus de mélange de poudres fixatives toxiques ni de dilution de solutions concentrées avec un pH non optimal.  Il suffit d’ajouter ces solutions fixatrices aux cellules ou tissus et de les incuber pendant 10 à 15 minutes à température ambiante. Ils sont idéaux pour toute méthode de détection basée sur les anticorps, y compris l’immunocytochimie (ICC), l’immunofluorescence (IF) et l’immunohistochimie (IHC).

Les caractéristiques des Image-iT solutions fixatrices incluent :
• Fixateurs prêts à l’emploi
•, de haute pureté, de qualité imagerie avec un minimum d’artefacts•
de signal de fond Sans
• méthanol Optimisés pour le marquage secondaire des anticorps, la coloration par colorants cellulaires fixes, etles solutions
fixatives colorimétriques IHC

4% Formaldéhyde ou paraformaldéhyde Des solutions fixatives à 4% de formaldéhyde et de paraformaldéhyde sont les fixatifs les plus couramment utilisés pour l’immunocytochimie (ICC), l’immunofluorescence (FI) et l’immunohistochimie (IHC).   Image-IT™ Paraformaldéhyde 4% dans un tampon phosphate 0,1M pH 7,4 (Cat. Non. I28800), est fournie dans un sac de dix flacons de 10 mL chacun. Image-iT™ Le formaldéhyde à 4% dans le PBS est fourni en format de 20 mL (Cat. Non. FB002) ou 5 x 20 mL (Cat. No R37814). Le paraformaldéhyde/formaldéhyde 4% dans un tampon phosphate de 0,1 M a ∼une osmolarité inférieure de 300 mOsm que dans le PBS, ce qui aide à maintenir la morphologie cellulaire avant que le fixateur n’ait la chance de fixer les compartiments cellulaires internes. Pour le paraformaldéhyde/formaldéhyde dans le PBS ou le tampon phosphate, il suffit d’ajouter le fixateur aux cellules et de les incuber pendant 5 à 10 minutes à température ambiante. Lavez les cellules dans le PBS après l’incubation et passez à l’étape de blocage.

Paraformaldéhyde 3%, glutaraldéhyde 0,35% solution
fixativeLe paraformaldéhyde à 3% avec 0,35% de glutaraldéhyde est une solution prête à l’emploi fournie dans un tampon de cacodylate de sodium de 0,1 M sans méthanol. Yuan Qin et al. (1) ont constaté qu’un mélange de paraformaldéhyde et de glutaraldéhyde peut mieux préserver la morphologie mitochondriale que l’un ou l’autre seul.

Le paraformaldéhyde est une petite molécule qui pénètre rapidement les cellules et les tissus, fixant les protéines et autres molécules en place. Le glutaraldéhyde est une molécule plus grosse avec deux groupes aldéhyde réactifs qui augmentent le potentiel de fixation et aident à créer de longues chaînes de glutaraldéhyde, générant une matrice. Cette capacité aide à préserver la localisation des protéines dans des environnements complexes tels que les mitochondries.

Pour fixer les cellules/tissus, il est recommandé de 5 –à 10 minutes d’incubation à température ambiante. Avec le glutaraldéhyde, une autofluorescence accrue peut être observée grâce à une présence accrue de groupes aldéhydes réactifs. Pour aider à réduire cette autofluorescence, environ sept minutes d’incubation avec 0,1 M de glycine ou de borohydrure de sodium fraîchement préparé à 0,1% (p/v) sont recommandés après fixation mais avant le blocage.

Solution
fixative au glyoxal à 3%Le glyoxal est une molécule plus petite que le formaldéhyde ou le glutaraldéhyde. Il pénètre rapidement les cellules/tissus, fixant les protéines et préservant la morphologie cellulaire mieux que le formaldéhyde (2). La solution fixative au glyoxal à 3% est une solution fixative prête à l’emploi fournie dans deux bouteilles distinctes : Composante A (92 mL) et composante B (8 mL), contenant de l’éthanol absolu, une solution de glyox, de l’acide acétique et de l’eau. Mélangez la solution A et la solution B dans un flacon vide, rassemblez les deux solutions par vortex et atteignez un pH de 4,5 avec l’ajout de 1M NaOH. Une fois mélangée, cette solution doit être utilisée immédiatement. Pour fixer les cellules/tissus, incubez la cellule/tissu à température ambiante pendant environ 10 minutes.

Références
1 : Qin Y, Jiang W, Li A, Gao M, Liu H, Gao Y, Tian X, Gong G. La combinaison du paraformoldéhyde et du glutaraldéhyde est un fixateur potentiel pour les mitochondries. Biomolécules. 10 mai 2021; 11(5) : 711.
2 : Richter KN, et al. Le glyoxal comme fixateur alternatif au formaldéhyde dans l’immunocoloration et la microscopie à super-résolution. EMBO J. 4 janvier 2018; 37(1):139-159.