Invitrogen™ CellEvent™ Réactifs de détection Caspase-3/7

Les caractéristiques de ces indicateurs incluent :
• Substrat de caspase-3/7 optimisé pour l’analyse
• de l’apoptose. Facile à utiliser—, ajouter et lire; aucune lyse cellulaire requise•
. Utilisation pour les mesures du parcours temporel; sélection facile du point temporel d’intérêt
•. Compatible à la fois avec les méthodes d’imagerie par fluorescence cellulaire vivante et les méthodes•
de fixation à base de formaldéhyde. Multiplex—compatibles avec d’autres réactifs fluorescents pour confirmer l’apoptose dans la même cellule ou population

CellEvent™ cellulaire. Réactif de détection verte Caspase-3/7: Maxima d’absorption/émission de ∼502/530 nm. Détectable avec un ensemble de filtres traditionnels FITC/GFP.

CellEvent™ Réactif de détection rouge Caspase-3/7 : Maxima d’absorption/émission de ∼590/610 nm. Détectable avec le filtre rouge traditionnel du Texas.

CellEvent™ Le réactif de détection rouge Caspase-3/7 et CellEvent™ le vert Caspase-3/7 sont fournis en poudre sèche. Il suffit d’ajouter 100 μL de PBS pour sécher la poudre afin de générer une solution 100X Stock. Diluez cette solution 100X 1:100 dans un milieu complet et colorez les cellules pendant 30 à 60 minutes, puis analysez au microscope à fluorescence.

CellEvent™ Le réactif de détection rouge Caspase-3/7 est également fourni comme solution DMSO déjà préparée. La solution DMSO est une solution standard 400X, prête à l’emploi. Il suffit de diluer dans le milieu de croissance à 1:400 et de colorer les cellules pendant 30 à 60 minutes.

Pour empêcher les cellules apoptotiques de s’emporter, aucun lavage n’est nécessaire à la fin du sting. Les cellules colorées peuvent être analysées vivantes, ou peuvent être fixées avec une solution de paraformaldéhyde à 4% telle que Image-IT™ le paraformaldéhyde à 4% dans un tampon phosphate 0,1M pH 7,4, Cat. Non. I28800. Ces cellules fixes peuvent être traitées davantage pour le flux de travail ICC.

Caractéristiques
CellEvent du substrat Les réactifs de détection de caspase-3/7 sont un peptide de quatre acides aminés (DEVD) conjugué à un colorant liant les acides nucléiques. La séquence peptidique DEVD est un site de clivage pour la caspase-3/7, et le colorant conjugué est non fluorescent jusqu’à ce qu’il soit séparé du peptide et lié à l’ADN.

Principes d’action
CellEvent Le réactif de détection verte caspase-3/7 est intrinsèquement non fluorescent, car le peptide DEVD inhibe la capacité du colorant à se lier à l’ADN. Cependant, après l’activation de la caspase-3/7 dans les cellules apoptotiques, le peptide DEVD est fendu, permettant au colorant de se lier à l’ADN et de produire une réponse fluorogénique brillante.

Protocole
simple en trois étapesPour utiliser CellEvent le réactif de détection Caspase 3/7, il suffit de l’ajouter aux cellules, de l’incuber pendant 30 –à 60 minutes, puis de visualiser. Les cellules apoptotiques avec la caspase-3/7 activée auront des noyaux verts ou rouges brillants, tandis que les cellules sans caspase 3/7 activée auront un signal fluorescent minimal.

La polyvalence du test permet la détection et la fixation
des cellules vivantesCe test robuste permet d’examiner l’activation de la caspase-3/7 dans les cellules vivantes. De plus, puisque les étapes de lavage ne sont pas nécessaires pour la détection, les cellules apoptotiques fragiles, généralement perdues lors des étapes de lavage, sont préservées. Il est important de noter que le signal fluorescent du CellEvent réactif de détection Caspase 3/7 peut survivre à la fixation et à la perméabilisation. Cela permet la flexibilité de réaliser des tests de fin et de sonder d’autres protéines d’intérêt en utilisant l’immunocytochimie.